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标题: 关于CIK试验中的一些问题，麻烦大家来解答一下，谢谢 [打印本页]

作者: 113305060 时间: 2013-2-22 16:32 标题: 关于CIK试验中的一些问题，麻烦大家来解答一下，谢谢

我这几天做实验，有几处不明白的地方，望高手解答，谢谢！. |+ e5 B' Q0 [9 E6 ?9 R
1.第0天加混有1000U/ml的IFN-r 1640培养基后，等24h以后，是把细胞离心后再加入含CD3和IL-2的完全培养基，还是直接在含有IFN-r的培养基中加入CD3和IL-2？？？/ `7 _1 w# I& W; f' f& W
2.隔2-3天换液的时候，是要把细胞离心后再换只含有IL-2的完全培养基？？？还是直接在含有CD3和IL-2的培养基中添加IL-2的培养基？？？

作者: easternliu 时间: 2013-2-22 16:51

都是直接添加，无需离心。你不放心可以一分为二，做对照自己对比结果。

作者: sunny.yc 时间: 2013-2-22 16:56

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建议不要离心，离心后的细胞有可能会因为生长环境变化，1-2天内停止生长

作者: 硕果累累_555 时间: 2013-2-22 17:16

不用离心，直接扩大体积即可。

作者: ljl1988115 时间: 2013-2-25 08:43

直接加就可以了，IFN-γ的作用是增加细胞毒性。

作者: 113305060 时间: 2013-2-25 09:30

哦，那每次细胞换液的时候要不要将细胞计数一下，不然怎么能确定每次加的量是多少呢？

作者: cheeray 时间: 2013-2-25 15:50

直接在含有IFN-r的培养基中加入CD3和IL-2

不用离心吧对细胞不好。。。细胞较少时经常动细胞，不利于细胞生长。。

作者: 113305060 时间: 2013-2-25 17:13

如果直接加含IL-2的培养液的话，那每次加多少，我隔一天加10ML可以吗？麻烦大家解答一下，谢谢

作者: 我是丁香 时间: 2013-2-26 09:29

养细胞的过程需要时间慢慢摸索。

作者: 细胞海洋 时间: 2013-2-26 11:02

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你回复谁就点击对方回复帖子中的回复按钮然后输入内容像我这样

否则他会看不到

作者: sunny.yc 时间: 2013-3-4 13:29

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这个要根据你们的培养体系来制定到底加多少，或者固定加多少或者根据细胞生长情况加多少，不同的培养体系要求也不一样的

不同的时间段添加的新鲜培养基也不同

我个人认为，添加培养基要根据细胞来说，比如细胞需要培养基了，培养液变黄了，就该添加了

作者: daifenghao 时间: 2013-3-4 14:19

一般是隔两天添加等量的培养液、5%同血型血清、CD3 25ng/ml\IL-2 500u/ml，以此类推，加到大概20天左右收获细胞，分三次收获。不换液不离心。具体加液间隔时间，以培养基颜色变黄为准，颜色发黄就应该加液了。

作者: daifenghao 时间: 2013-3-4 14:21

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请教一个问题，我ficoll离心，吸白膜层，吸了过多的红细胞，这些红细胞在培养液CIK时，会有影响吗？

作者: sunny.yc 时间: 2013-3-4 17:32

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我不好说你们的体系会不会有影响，我在培养CIK的时候，即便是有很多红细胞，也不会有太多影响，细胞生长还是很正常的

作者: daifenghao 时间: 2013-3-4 17:40

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哦，谢谢！那我就放心了

作者: flys100 时间: 2013-3-4 21:20

直接加就行了，至于扩增速度要看你的初始细胞密度和生长速度。无需离心。

作者: sunny.yc 时间: 2013-3-5 09:30

回复 daifenghao 的帖子* t1 n' q+ z( h" U. Y/ y% ~
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实验室可以备点红细胞裂解液，按照使用说明书裂解一下，难度不太大，根据说明书就行

作者: wjp130 时间: 2013-3-14 11:48

回复 daifenghao 的帖子# C% J7 f( m" h, ?
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颜色发黄加液，会不会导致细胞密度偏低

作者: 只因偶然 时间: 2013-3-14 16:41

建议不要离心，离心后细胞多少会有损伤，加入新的培养基中又要一个适应期，不利于细胞培养，建议直接加培养基。不知道有没有特殊类的细胞培养过程中是需要离心加入新的培养基培养的，有的交流下。

作者: realff 时间: 2013-3-30 14:53

不用离心，直接加液。一般前5天不用怎么补液吧。补液除了看颜色，我认为还是要计数啊，因为光靠经验怎么做到标准化？自己多计数多累经验，掌握一种培养基最高的培养密度，每次传代前计数结果作为是否要补液、补加多少的依据。

作者: wwxx66 时间: 2013-4-20 19:03

没有必要离心，离心对细胞会有伤害。一般都是直接加的，一些国外的文献做的比较的细致，往往离心后再加入CD3和IL-2。这都是做科研，在大规模生产中不适用，不实用！

作者: 硕果累累_555 时间: 2013-4-22 09:57

不要离心，否则会损失细胞。直接扩大体积即可。

作者: weijunning 时间: 2013-5-8 15:55

一般是直接将新的因子加入原来的培养体系。置于多久补一次液，每次补多少，这需要经验摸索。一般是培养第1天补液，30ml/瓶，是175的大瓶，之后就不要管了，直到细胞密度合适，细胞数达到8.0X107左右（外周血），1X109(单采），就按2~5X105的密度转袋培养；在培养袋中一般是隔两天补一次液，补液量根据细胞数，保持生长密度1x106.在回输前再补一次液即可。不建议中间频繁给细胞补液换液，增加污染几率。

作者: lyj-0017 时间: 2013-7-7 12:26

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前5天都不用怎么补液？请问你们是用的瓶子还是袋子培养的呢？

作者: lyj-0017 时间: 2013-7-7 12:54

回复 weijunning 的帖子( W8 l* _: ]% G5 b* J% g0 M$ F

在培养袋中培养时，两天的时间细胞应该不会增殖那么快吧？这时加液的话，细胞密度应该会降低吧？加液后，形成的细胞集落会不会大片聚集呢？

作者: xld1984 时间: 2013-7-7 17:10

不要离心，直接加。

作者: weijunning 时间: 2013-7-8 09:55

回复 lyj-0017 的帖子/ `& M; z# f+ m. Z# \) E
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一开始是在175培养瓶中培养，分离第二天补液30ml/瓶，之后就不要再补液了，因为期间细胞增殖不是很快。第5天左右瓶中的细胞一般会长起来，这时收集计数，按1.0~5.0X105密度铺培养袋。

作者: DannyXia 时间: 2013-7-9 12:08

不需要离心，对细胞生长会有影响。
另外第0天是加IFN-γ，直接加入细胞中，第1天CD3和IL-2也是直接加入细胞中。

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