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标题: 请教免疫荧光的一些细节问题 [打印本页]

作者: 请叫我晓白 时间: 2013-2-27 19:54 标题: 请教免疫荧光的一些细节问题

我做心脏的免疫荧光，因为我们切片是要送到其他科室去请人切片的，所以想取完一批标本后一起送去切片，那么取出的心脏该怎么保存呢？看到有人说用多聚甲醛固定，蔗糖脱水沉底，然后-80度保存。是这样吗？$ v8 N9 b: Q% F
另外必须用过氧化氢处理及血清封闭吗？我看到有人的方法没有这样处理。
如果有前辈给出详细步骤，就万分感谢啦
新手，请各位多指教啊

作者: monk125 时间: 2013-2-27 20:06

幸运的话会有个研究心脏的那个组的人给你答复坐等

作者: frankieisme 时间: 2013-2-28 05:09

本帖最后由 frankieisme 于 2013-2-28 05:15 编辑
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回复请叫我晓白的帖子

如果只是做普通的免疫荧光，10%的甲醛常温固定不低于24小时，送标本去切片，回来后按常规脱蜡，封闭，抗体孵育，镜检；如果是要查新鲜GFP则需要冰冻切片，新鲜标本在4%多聚甲醛固定后用OCT包备，液氮上迅速让其冻成块，随后就可切片，封闭，抗体孵育，镜检。

作者: 请叫我晓白 时间: 2013-2-28 15:57

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我看到有人的新鲜标本没有固定 OCT包埋，取下心脏后直接拿去冰冻切片，然后丙酮固定，封闭，加抗体镜检。而有人就如你所说，固定过夜后，蔗糖脱水OCT包被这样处理的。到底哪种好些呢？我可以取下心脏后放在冰块里送去请人切片吗？切片后-20保存可以吗？

作者: frankieisme 时间: 2013-3-2 06:42

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你可以准备好液氮,取好标本后用OCT包埋后再送去切片,之后可以-20度保存。如果要检测GFP，最好当天染色镜检！

作者: daviddow 时间: 2013-3-3 12:13

-20度啊就可以，不要要处理一下

作者: hbs08230 时间: 2013-6-20 17:53

不用很复杂，0 J! \; k; L" X! u- H: L7 G! t. I! s
石蜡切片：新鲜组织在福尔马林（3-4%甲醛）浸泡48小时，换入70%乙醇浸泡24小时，之后可以在70%乙醇里4度长期保存。（2年内都可用）
冰冻切片：新鲜组织直接包埋OCT，放在干冰或是放入-80℃直到冻结实，之后一直存在-80℃也可长期保存。

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