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标题: 无血清培养肿瘤干细胞，细胞很容易aggregation，请问怎样处理 [打印本页]

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作者: wy200616    时间: 2013-3-4 15:12     标题: 无血清培养肿瘤干细胞，细胞很容易aggregation，请问怎样处理

我用无血清培养基，加生长因子培养肿瘤干细胞，corning公司的低吸附瓶，但是细胞容易aggregation，该怎样处理呢？谢谢了！

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作者: 硕果累累_555    时间: 2013-3-4 16:16

肿瘤干细胞就是悬浮培养的啊，通常都会聚团成长的。

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作者: qq348940434    时间: 2013-3-5 13:36

是不是细胞因子浓度问题，我到现在都没把干细胞给养出来。. ]) Y% P5 B6 A% x2 ~4 @
  还有就是 你那个corning公司的吸附板是用的那个3471的六孔板么？

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作者: 570505    时间: 2013-3-5 20:44

回复 wy200616 的帖子! v' @2 z0 e) D
& o, z; s  [4 n) O% b
aggregation是悬浮培养中经常遇到的问题。是肿瘤球培养的大忌。% }$ [- b3 i: w- }% M. f
下次你可以注意一下：一是细胞浓度不可过大，细胞过密容易聚集。
- f+ A8 N0 n* g( z3 [                    二是摇晃要适度，不可过于剧烈。& U' b9 O. c- H) z
                    三是你可以试试先贴壁培养，然后再用干细胞培养液刺激成球，这是防止聚集的重要方法。' Q* i2 ?4 [: A! B( |; E4 e; ~

, k' o# w$ {  @5 e. T, q/ @解答完毕。

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作者: qq348940434    时间: 2013-3-6 09:24

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- f" [4 F/ o' F2 N; Q2 \9 r6 h4 K% w% ?
你所说的先贴壁培养，再用干细胞培养基养，我上学期也有试过，但是不知道为啥，也没养出来，养了5天左右就看见一瓶子的膜一样的东西飘着。。。

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作者: 570505    时间: 2013-3-6 22:52

回复 qq348940434 的帖子
8 i; f! T7 B2 t: S" F8 Y4 t) B2 v% H, N  j- r* w2 X9 B9 k  O, ?
那应该是细胞有污染了

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作者: mike19840320    时间: 2013-3-7 11:01

是细胞密度太大的问题，可以在96孔板中，使没孔1个或2个细胞，这样就不会发生细胞聚集。

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作者: qq348940434    时间: 2013-3-7 11:23

回复 570505 的帖子* a+ G6 X" b, n' K
: {* W( ~5 j# j( F
没，这种绝对不是细胞污染的样子，应该是细胞浓度的问题，还有可能就是我生长因子的浓度高了，我是EGF和bFGF都是40ng/ml的浓度。

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作者: qq348940434    时间: 2013-3-13 09:35

回复 570505 的帖子
' b+ q0 V0 Y2 [0 V/ x0 T, I2 a6 T7 r# ~+ A" a) q$ M
请教个问题，为啥我按你所说的第三种方法 里面直接加入无血清培养基（生长因子），然后过了1天，现在看起来都是浑浊的。

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作者: xiaolong    时间: 2013-3-13 09:50

悬浮生长，能看到聚团的，很正常，就像单个微生物培养后生成菌落一样一样的

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作者: qq348940434    时间: 2013-3-13 09:57

回复 xiaolong 的帖子% `0 _+ d% u  g$ v9 R4 N" Q: k
3 W7 t0 m* h/ f1 Q; e+ W
不是。我现在养出来第二天就感觉是培养基变浑浊了的样子。

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作者: wy200616    时间: 2013-3-13 16:37

回复 qq348940434 的帖子3 m4 j" t8 u) L0 U3 k% A8 t+ d8 [
, S$ `& Y" B$ b* H
我用的是3814培养瓶

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作者: wy200616    时间: 2013-3-13 16:39

回复 570505 的帖子) T- s$ k. X5 }0 V

( R5 r+ n9 C% X0 l2 J' b4 K7 Y# _谢谢你了！我因为需要大量细胞做其他实验，所以细胞浓度太大，因为怕聚集，所以摇晃很厉害，结果适得其反啊！! S  `2 Z6 [4 K& l( g! \7 x8 R, a

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作者: wy200616    时间: 2013-3-13 16:40

回复 qq348940434 的帖子
2 u7 O4 N8 \6 B& f8 c8 E0 U& u- E& H" R
上面漂了一层可能是死细胞碎片

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作者: qq348940434    时间: 2013-3-14 09:10

回复 wy200616 的帖子
! y, M3 @8 w' N) Z; w1 [/ @+ q3 Q; ]8 ~* B# U5 u8 D$ |7 p% c9 T
感觉是不是用少量的化疗药物也能把干细胞给养出来呢。% ?& _$ w1 x& E* }
   只是还不知道用哪一类的化疗药和剂量。

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作者: zarbitter    时间: 2014-2-24 21:03

570505 发表于 2013-3-5 20:44 " H5 s3 x+ W" N
回复 wy200616 的帖子
4 e" x) b8 x7 G- h! ^8 k+ W  B, d8 m0 N: N. ^; W1 ]1 K
aggregation是悬浮培养中经常遇到的问题。是肿瘤球培养的大忌。

) f" ^! V2 f6 D* f% D, [4 W你好，我做了好几次肿瘤干细胞的成球试验了，一直 没成功，这次竟然还贴壁。我先给问问你说的第三步是怎么做的？干细胞培养基刺激成球？？

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作者: zarbitter    时间: 2014-2-24 21:04

zarbitter 发表于 2014-2-24 21:03
) y8 w0 l9 A* v( x' O& e5 P: c你好，我做了好几次肿瘤干细胞的成球试验了，一直 没成功，这次竟然还贴壁。我先给问问你说的第三步是怎么 ...

3 o9 i6 ^9 F1 F/ e! I7 ^打错字了，“我先给问问你说的第三步”是我想问问。。不好意思

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作者: sxltc    时间: 2014-3-25 14:36

回复 zarbitter 的帖子
/ g$ f+ J4 H# [
8 S  `& m$ q+ S" ~朋友，你的干细胞养的怎么样了？

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作者: zarbitter    时间: 2014-4-24 21:30

回复 sxltc 的帖子2 r0 N- R: F$ W; G1 R9 b) g

; h  }# h: P& t, C' E& A& \不行啊。。我要疯了！！

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作者: KINGxuridongshe    时间: 2014-5-27 00:24

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3 g$ _, t9 m* T: j7 c/ _
' m. L& ^9 n! B7 z你好，请问你现在养的sphere怎么样了？还是会发生聚集吗？我最近也在进行这方面的工作，但是老是细胞发生聚集，请你指教！

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作者: 细胞海洋    时间: 2014-5-27 07:54

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! K% N  p8 K8 G
# k, ]# t, Y' p9 {/ w建议你发新帖提问

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作者: 小人歌志    时间: 2014-6-4 21:55

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4 f4 T4 p- j+ Y0 K+ Q/ O: E# q
. W: F5 z% w/ N' \& @. H培养时要不停的摇晃么？求问你这里的摇晃是什么意思啊？
" D7 @  t- r2 G4 A, \8 Q, l

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作者: 细胞海洋    时间: 2014-6-5 08:36

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# m" e# Y2 r0 Z% A2 Q
- y( Q" x6 }* K) }% W9 D建议你发新帖提问

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