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标题: 慢病毒感染干细胞怪现象 [打印本页]

作者: sizhengliu 时间: 2013-3-25 22:31 标题: 慢病毒感染干细胞怪现象

最近实验遇到问题，请大家支招！
我用慢病毒感染人成体干细胞，96孔板内，设置了3个MOI组（20,100,180），3天后观察荧光，发现2个怪现象，求解释：
1，整体看，荧光率非常低，最好的孔内不会高于50%，有些孔甚至一个视野就1-2个发弱光的。
2，各MOI组之间的荧光率差别较小，最好的孔与最差的孔可能就相差10%左右。
plus，我的基因启动子是CMVIE，带zsgreen的。

作者: yuhaoze 时间: 2013-3-25 22:39

确实很怪

作者: Jonathan 时间: 2013-3-26 09:54

这么高的MOI，按照经验，是应该出现很多死细胞。如果没有的话，就只能说，滴度有问题。还有一个可能，就是病毒包装有问题，没法进入细胞

作者: monk125 时间: 2013-3-26 16:20

是不是病毒失效了

作者: 穿越地平线 时间: 2013-3-27 23:13

Jonathan 发表于 2013-3-26 09:54 0 K" ~7 a; U) ^
这么高的MOI，按照经验，是应该出现很多死细胞。如果没有的话，就只能说，滴度有问题。还有一个可能，就是病 ...

同意楼主的说法

作者: 穿越地平线 时间: 2013-3-27 23:14

病毒式自己包的还是外包的？

作者: receiver1 时间: 2013-3-29 09:46

我觉得，只要有荧光，就不是质粒的问题。还是你没感染上。你感染的是什么细胞？如果你的细胞状态养的不好的话，也可能出现这种情况。还有就是你可以把病毒浓缩一下去感染看看怎么样。

作者: ciweiyuan 时间: 2013-3-29 10:03

回复 Jonathan 的帖子1 I ~" q3 }' p
9 u) Y# [# K/ L
同意，很有可能是病毒无法进入细胞，看看细胞的状态

作者: axh 时间: 2013-3-29 10:29

可能病毒保存出了问题，是不是被反复冻融了若干次？5 O6 N6 ?' t0 d; S5 A
另外，你滴度是怎么测的，可信么？

作者: sizhengliu 时间: 2013-4-5 02:46

回复穿越地平线的帖子9 I" }: t/ w$ T: \9 l9 {, q- v

是公司包的

作者: sizhengliu 时间: 2013-4-5 02:48

回复 axh 的帖子+ @5 f% D& q! p' ~ h3 ?

没有反复冻融。 a4 }) L5 u7 q" A1 Q
测滴度是用的QPCR法。

作者: wys7416 时间: 2013-4-5 04:43

应该是病毒保存出了问题，可能冰箱由于停电等原因，导致反复冻融以致滴度下降，所以感染细胞才出现这样的情况，我就遇见过这种情况，冰箱有几次停电导致病毒融化了，后来来电，重新冻上，但感染效果急剧下降，后来几乎就感染不上了，废了，重新买的

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