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标题: 荧光二抗效价1:10是指稀释比例吗 [打印本页]

作者: 请叫我晓白 时间: 2013-3-31 15:21 标题: 荧光二抗效价1:10是指稀释比例吗

我买的羊抗大鼠荧光二抗说明书上写的工作效价是1:5-10 是指用的时候按1:5-10稀释吗
这个浓度会不会太高了啊
另外二抗要求-20度保存
如果我最近一周经常用可否在4度保存一周呢？& \, g* {3 k& p( a% v. l
用之前需要离心吗？

作者: huangcong1988 时间: 2013-3-31 16:29

说明书上写的是1:5~1:10的话，您就按照这个比例稀释就行了啊，不过一般二抗的稀释度是100~200，如果长时间要是用的话，放4度放一周后也没有问题

作者: youlesi888 时间: 2013-4-1 08:59

可以放

作者: Life_Tech 时间: 2013-4-1 10:43

回复请叫我晓白的帖子. x3 C- t! d5 Z1 J. O; r/ o( f

1:5-10是稀释比例，但是这样稀释比例做出来一般背景都会比较高，应该说不是很理想的抗体。我们只有自己制备的抗体出现过这种情况，商业化的很少用这种稀释比例的。9 Q* |5 i; x0 n+ }) J3 r
4度存放一般问题不大，但是本来效价就不高，不建议你放4度。如果实在要放，建议你分装成小管的，将小管的放4度，如果不好用了再解冻其他分装的小管。

作者: axh 时间: 2013-4-1 13:09

可以加等体积甘油，这样放-20度还是液体状态，拿出来用了再放回，不存在反复冻融。但切记取用时混匀，因为甘油密度大，易沉底。

作者: 请叫我晓白 时间: 2013-4-1 19:57

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原来的规格是0.5ml，一般分装多少ul一管呢？1 G2 B$ b }. r6 w$ k& p
如果分装需要稀释吗？如果不稀释会不会很少

作者: Life_Tech 时间: 2013-4-2 11:54

回复请叫我晓白的帖子! n D; B5 V& A3 j
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由于你的稀释比例太低，一张片子最少要加200-300ul才能覆盖，如果按照你的1:10的稀释比例，每次最少要用20-30ul。主要根据你的实验来吧，如果一次做的片子多，可以直接分成两管就可以了。如果每次做一张可以分装成100ul每管的，每管用个三四次。

分装是不稀释的，尤其是你现在的效价已经不高的情况下。用的时候再根据你要用的量吸出来稀释。

以上都是个人经验供参考，不代表公司官方言论。

作者: 请叫我晓白 时间: 2013-4-2 19:42

回复 Life_Tech 的帖子, l7 S; L3 ^" \7 X4 Z! G
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一张片要200ul吗？可是我之前做的片50ul二抗就覆盖了心脏组织了。如果按每张片50ul的话，我做8张片需要400ul，也就是二抗40ul。是否是我之前的二抗加少了才会出不了结果呢？

作者: Life_Tech 时间: 2013-4-8 10:05

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也不是严格的说需要多少，只要你确保片子不要干了就行。有时候为了省抗体加得少也是可以的。如果你是在37度孵育尤其要注意了。

作者: hbs08230 时间: 2013-6-20 17:28

1:10 稀释出来不会爆么？？我们组用的萤光二抗是要稀释1:5000的。
先做一个梯度测试一下吧，1:10，1:100，1:500，1:1000，1:5000。
有一个东西叫liquid blocker，像一支笔一样，可以在载玻片上圈上sample，然后在圈内加上抗体时液体不会溜出去~~最多用8ul就能覆盖一个sample了·省点3ul都能染~

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