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标题: 脐带MSC真是mSC吗？还是成纤维细胞？ [打印本页]

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作者: henryjia    时间: 2013-4-3 00:39     标题: 脐带MSC真是mSC吗？还是成纤维细胞？

都说脐带好养活，可是那些细胞似乎都是成纤维细胞，分化能力很差。我做的流式细胞检测很好，可是成指成骨分化很差。
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! ~3 A  R: i$ C  f请指教

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作者: youlesi888    时间: 2013-4-3 10:15

楼主用的什么牌子分化培养基

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作者: menghy    时间: 2013-4-3 10:19

这个可能还是和你分离的细胞纯度，以及培养条件，分化条件都有关系！毕竟这是经过了大量实验验证了脐带MSC具有多向分化潜能的。

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作者: uslzhang    时间: 2013-4-3 10:34

可能是你的分化试验没做好，其实脐带MSC的分化能力非常容易做成功。

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作者: coffee.cat105    时间: 2013-4-3 10:54

去年12月的干细胞与再生医学论坛上项鹏做过一个报告，认为说骨髓间质细胞有四个亚类，分化能力、增殖能力和免疫抑制能力都不相同，脐带做多了也有这么个疑惑，感觉脐带间充质似乎也存在亚类，也不知道是不是个体差异。
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4 A( u0 o4 _& }0 C0 |3 z, I  i楼主的分化实验是做了几次？是一株细胞吗？

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作者: jack1381818    时间: 2013-4-3 10:57

可能是你的分化试验時添加誘導因子培養基比例有不符所以生長没做好

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作者: zhang861006    时间: 2013-4-3 14:37

成纤维细胞和间充质细胞真还差不多，外形和流式结果都很类似，但是成纤维细胞应该能分泌纤维蛋白，间充质细胞传到N代后也常常在培养液中能看到分泌的蛋白团，这应该是间充质向成纤维细胞分化的结果

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作者: 老姜    时间: 2013-4-3 18:39

回复 henryjia 的帖子& X# L% ^) w4 O) T2 j( b1 k
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脐带间充质细胞是经流式、分化潜能、粘附性等间充质干细胞的实验研究证实具有间充质干细胞的特征。但是它诱导分化成功的时间（无论是成骨还是成脂细胞）远远长于人骨髓。骨髓细胞是成人体细胞，脐带间充质细胞毕竟更接近"胎"细胞(这样说不准确，但好理解)。也可以理解为它的细胞阶段多为早期祖细胞，也就是更接近干细胞阶段，将此诱导成为成熟的骨细胞或脂细胞“走”的时间要更长；骨髓细胞多含接近成熟阶段的祖细胞（典型的例子，机体一缺血，造血祖细胞立即启动分化为成熟血细胞以补偿失血），诱导成为成熟的骨细胞或脂细胞“走”的时间相对要段些。这也是我验证后的经验。分享!

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作者: henryjia    时间: 2013-4-4 03:45

对谢大家的回复，我用的是R&D的现成的成指，成骨添加剂。稀释后加到含10%血清的aMEM中，骨髓MSC 2周左右效果非常好。但是我的脐带细胞却只有很少成指的，成骨的钙沉积也很少。

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作者: henryjia    时间: 2013-4-4 03:46

回复 老姜 的帖子
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; o; k* g( D* M) B老姜你好，谢谢回复。能请教你是用的什么培养基养脐带MSC吗？分化实验培养基是那种？分化时间有多长？

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作者: henryjia    时间: 2013-4-4 03:48

回复 jack1381818 的帖子; z' _6 r, A2 g7 `  X# I

- {: `5 J3 m& l1 t能请教你是用的什么培养基养脐带MSC吗？分化实验培养基是那种？分化时间有多长？9 X6 _. V; o5 n4 o

4 g( W. I' W3 Q, _是不是不能用骨髓MSC 的分化方法？

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作者: henryjia    时间: 2013-4-4 03:49

回复 coffee.cat105 的帖子* E% e- N) W% d0 B* q
& e( S6 k+ {* m" D. ^5 b  v# a
我至少试了三个样本，成骨成脂最长达3周。

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作者: henryjia    时间: 2013-4-4 03:52

回复 老姜 的帖子
  v  f* m* D+ X& k1 `# c: m
" M* b( N7 c1 V, _/ j' E" r4 X我对文献持怀疑态度，不知道各位同仁有没有自己试验成功的。
5 E+ J' F. D# c. z2 E- ]/ }
! I9 b/ I2 k. g  Y很想知道，是不是真的可行。唉，进展缓慢，急呀！

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作者: 老姜    时间: 2013-4-5 01:27

回复 henryjia 的帖子( ^1 O% F* s1 a0 d4 t7 [

- X4 X7 H' F/ J* s8 `; U分化培养液配方是文献常用的就行。培养液为ＬＧ－ＤＭＥＭ，血清是Ｇｉｂｃｏ澳洲产的。

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作者: 老姜    时间: 2013-4-5 01:33

回复 henryjia 的帖子* b6 }, F6 H# d; Z. `9 t; C
0 \' z8 n) d) K: I* ^! P
脂肪诱导技巧：使用质量差的血清诱导脂肪分化相对快点，诱导约２０－３５天；( g% _6 Z$ T! X' J
成骨诱导技巧：避光！试剂，换液均避光，少在显微镜下观察，多个样本时只观察一个样本，诱导约２０天以上。

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作者: henryjia    时间: 2013-4-5 21:46


# U* x& ~) ~9 ]! V5 U, n8 N& f# l/ n" x) P/ G& d
回复 老姜 的帖子
, X# v1 ~: w3 p7 D& ~7 f5 T# B4 m+ V: Q# S
您有没有用R&D现成的那种分化添加剂？
6 f. I$ N/ k) }4 I2 d2 K* D7 Y1 E3 ]# Y2 v6 O1 B
我做的可以观察到酯化液滴，但是很少。成骨很弱。( Y2 t5 a0 H) l# `" @

5 o3 o" p! E: j0 H9 A9 D( W  w细胞形态非常好，流式结果也很好。所以很郁闷。$ O# o! R* D; B
9 S5 l, J. i! ~# Q
是否可以请教您的分化配方吗？ : x% m3 Q& z# c* k& G" ]2 j
, F* _3 r  `; d+ M- z2 s# l
请您指教。多谢" v1 B2 K" i  k% y( f! r

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作者: weibin2002    时间: 2013-4-5 23:13

干细胞会因为所处的阶段不同，诱导的条件和时间也有不同吧。骨髓的可以诱导成功，说明不是试剂的问题；可能诱导剂的浓度和时间等条件还需完善吧

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作者: 老姜    时间: 2013-4-6 10:45

回复 henryjia 的帖子7 }1 \2 A4 R: {# A

4 h% `8 ^& s" j: l/ o7 C, h  @, c6 ^成骨诱导：５０μＭ的Ｌ－抗坏血酸；１０ｎＭ的β－磷酸甘油钠；１０ｎＭ的地塞米松；１０％ＦＢＳ；２ｍＭ的Ｌ－ｇｌｕｔａｍｉｎｅ；１００ｕ／ｍＬ的Ｐ／Ｓ；补足ＬＧ－ＤＭＥＭ（避光，临用前加地塞米松）．
( B1 Q& y6 O! b2 C成脂诱导：完全诱导液：０.５ｍＭ的ＩＢＭＸ；１００ｍＭ的吲哚美辛；１μＭ的地塞米松；１０μｇ／ｍＬ的胰岛素；１０％ＦＢＳ；２ｍＭ的Ｌ－ｇｌｕｔａｍｉｎｅ；１００ｕ／ｍＬ的Ｐ／Ｓ；维持液：１０μｇ／ｍＬ的胰岛素、每三天换一次液，第一次用完全诱导液，第二次用维持液循环三个周期，一直用维持液换液，直至镜下见脂质滴形成，为使脂质滴多点，可多养几天。

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作者: henryjia    时间: 2013-4-7 05:15

回复 老姜 的帖子$ c" G! E5 F. q5 L( ]1 e, J6 x
! G* ^+ x4 s; S* \% ]5 t& X
多谢指教。

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