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标题: 跪求脐带间充质干细胞分化鉴定方法步骤，急急！！！ [打印本页]

作者: iytbxxg 时间: 2013-4-7 16:07 标题: 跪求脐带间充质干细胞分化鉴定方法步骤，急急！！！

要做脐带间充质干细胞分化鉴定，不知从哪里找实验方法和步骤，求各位大侠把相关方法步骤赠送，在此跪谢了！！！

作者: jack1381818 时间: 2013-4-8 16:10

暨南大學學報醫學版 2009 第4卷 p367-372( u) {( U% |1 k1 V0 _
http://wenku.baidu.com/view/2d1cbc8b6529647d2728521d.html
或許有想要的

作者: iytbxxg 时间: 2013-4-9 09:42

还可以，还在学习中，多谢

作者: 细胞海洋 时间: 2013-4-9 23:58

回复 iytbxxg 的帖子/ h) d" M. x8 H l+ x

http://www.stemcell8.cn/forum-34-1.html

作者: wuhuaguo88l 时间: 2015-9-18 16:19

这篇文献也许能提供一些帮助

作者: edwardellen 时间: 2015-9-23 19:34

分化诱导基本就是换成条件培养基培养，之后做染色鉴定。
(1)诱导向成神经元的分化
用含有3mmol/L β-巯基乙醇、5×10-7mol/L视黄酸（RA）的DMEM/F12预诱导24h，再用含5%FCS的DMEM/F12培养7d左右，检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达。* M7 w7 U% e. M" Y
(2)诱导向成肌细胞的分化
用1×10-4mol/L 5-氮杂胞苷诱导24h，然后用含有10μg/LbFGF的无血清DMEM/F12诱导2周左右，检测肌动蛋白actin 的表达。
(3)成脂诱导分化及油红O染色+ ?! Z4 }. A0 z) @- ]2 m7 ?- j8 V" `
细胞融合达70％时，去掉原培养基，PBS洗涤1次。以含有浓度为1 μmol/L地塞米松、浓度35 nmol／L胰岛素、浓度200 μmol/L吲哚美辛和体积分数为5％FBS的H-DMEM向脂肪细胞诱导，每3-4 d换液1次，观察到胞质中有脂滴形成时，吸去培养液，PBS洗涤2次，体积分数4％多聚甲醛固定15min，以质量分数为0.375％油红O染色20 min，苏木素复染2-5 min，显微镜下观察、拍照。
(4)成骨诱导分化的形态变化及碱性磷酸酶染色
细胞融合达60％时，去掉原培养基，PBS洗涤1次，以含有浓度0.1 μmol/L地塞米松、浓度10 mmol/Lβ-磷酸甘油、浓度50 μmol/L抗坏血酸和体积分数为10％FBS的DMEM/F12向成骨细胞诱导，每3-4 d换液1次。诱导3周后，吸去培养液，PBS洗涤2次，体积分数95％酒精固定10 min，水洗数次，放入碱性磷酸酶染色剂中，孵育4-6 h，自来水冲洗数次，质量分数2％硝酸钴反应5 min，质量分数1％硫化铵反应5 min，蒸馏水冲洗。显微镜观察，拍照。

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