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标题: 蛋白电泳上样量问题 [打印本页]

作者: 微笑流滢 时间: 2013-4-9 22:32 标题: 蛋白电泳上样量问题

大家好，做Western跑胶时，所有要检测的蛋白都必须保证上样量一样吗？比如，要检测一个好做点的蛋白和比较难做的蛋白（如Actin），可以难做的蛋白加大上样量，而那个比较好做的蛋白少上点样吗? 每一次电泳所有样品的上样肯定一样的

作者: sszxlijin 时间: 2013-4-9 23:25

western是比较组织中某一蛋白的情况，总的蛋白量，也就是上样量要求是一样的。

作者: 微笑流滢 时间: 2013-4-10 15:41

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嗯，如果是检测一个蛋白，所有样品的上样量肯定是一样的，可是假如遇到不好做的蛋白。太小的上样量可能做不出来，所以可能会加大上样量。这样可以吧？？？还是，，，，，，，

作者: sszxlijin 时间: 2013-4-10 21:29

回复微笑流滢的帖子+ m/ t' j& w9 X' \% Y! \
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可以加大上样量。

作者: 芦苇浅 时间: 2013-4-10 22:30

一张胶片上应保证每一个点样孔的上样量是一样的，这样才能对比出组织中不同细胞间蛋白的表达量的差异，如果上样量不同，那么每一个孔间就不具有可比性了。

作者: 微笑流滢 时间: 2013-4-13 11:09

回复芦苇浅的帖子# w1 T1 [1 V2 w+ o H$ C, _
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每个孔中蛋白的量肯定是一样的，但是有些蛋白如Actin好做，上5ug蛋白就可以出来结果，但是如果不好做的像磷酸化蛋白，每个样品上40ug 都不一定能做的出来，所以如果是同一批蛋白，就想多加一些蛋白把不好做的做出来。这样可以吧？我们老师说检测Actin和检测不好做的蛋白如磷酸化蛋白时必须保证所有样品都是5ug上样，可这样的话，磷酸化蛋白真不好做出结果那

作者: 微笑流滢 时间: 2013-4-13 11:10

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谢谢你

作者: aulenuyah 时间: 2013-4-17 09:40

个人觉得应该是可以的，不过点的样品要一一对应才行

作者: 250286645 时间: 2013-4-17 10:04

之前做WB的时候，不是有两种梳子吗？做出来的孔都大有小，大孔的量是10微升，小孔是5微升，加样的时候尽量慢一点，枪头放下去一点，还有要在天气晴朗的时候做，效果要好些，制胶也容易些。我有时候阴天做就跑不出来条带

作者: zsg 时间: 2013-5-7 11:43

可以这样做，只要每个孔上样量一样就可以。如果两个蛋白要做比较，即使不是一次做，建议还是上样量要一致。

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