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标题: 请问心脏冰冻切片需要甲醛固定，蔗糖沉底吗？ [打印本页]

作者: 请叫我晓白 时间: 2013-4-11 10:49 标题: 请问心脏冰冻切片需要甲醛固定，蔗糖沉底吗？

有的人说不用固定，蔗糖处理
也有人说必须要甲醛固定，请问到底需要不呢

作者: moluxingke 时间: 2013-4-11 11:44

不同的实验室习惯还真不一样。比如固定剂有的实验室偏好PFA，有的喜欢NBF，等。你问的有点笼统，如果只是做个切片，观察个形态或是做组化荧光之类的，可以不用蔗糖处理，组织可以预先固定也可以切成片子之后固定。如果要做lacz染色之类的话，就需要用蔗糖处理了。切片之后还需要固定一下。

作者: 请叫我晓白 时间: 2013-4-11 13:29

回复 moluxingke 的帖子

我做c-kit的免疫荧光，以前是直接取了心脏之后放冰袋中送病理科做冰冻切片。但是有人给我说必须用多聚甲醛固定，这种在心脏表达比较少，以前几次都没找到阳性细胞，现在都不知道到底是我的方法有误还是本身细胞少没找到的原因。( r! {% Q$ Z. A9 _ ~8 p6 c
请问直接送去做切片对不呢?还是需要固定之后送去做切片

作者: moluxingke 时间: 2013-4-11 15:19

放冰袋中？放了大约多久？我们一般是取了放在液氮中迅速冷冻，这样可以更好的保护蛋白减少降解。而且如果冷冻过慢的话，组织内容易产生冰晶。这样组织结构就容易受损。
切片后，如果准备做免疫荧光，那可以拿切片固定，固定剂不一定是PFA，也可以是甲醇、丙酮之类的。
如果对自己的方法有疑问，那你可以顺带上c-Kit的阳性组织作为阳性对照。

作者: 请叫我晓白 时间: 2013-4-11 15:58

回复 moluxingke 的帖子* m2 r4 e, Q" H6 o m$ H
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是的，大概10分钟吧，但是这样倒没见到冰晶。! h; U$ _" S% L3 W+ u
我是做完切片后立即放丙酮固定10min，干燥后然后放-80度存起来
这样可以吗- \* E0 N/ |$ {

作者: moluxingke 时间: 2013-4-15 09:36

应该可以的，不过我没有这么做过，呵呵，如果不立即做，我是先冻存，然后用的时候晾干，固定。

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