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标题: 抽质粒的时候怎么去除内毒素？ [打印本页]

作者: mhqh 时间: 2013-4-11 14:27 标题: 抽质粒的时候怎么去除内毒素？

我用Qiagen的kit抽质粒，里面有个buffer ER 是去内毒素的，但是，其他的buffer都有配方，就ER没有！但是ER还用得特别快！求ER的配方，或者是怎么去内毒素的原理？5 k$ n) Z8 E0 y8 |8 {# E9 A
谢谢！

作者: fguw 时间: 2013-4-11 23:57

你的柱子也是固定的，所以，公司不可能让你省钱的，0 D8 y& o) X9 _( R
另外，我们个人经验，自己配的试剂没有那么好使的，所以还是建议，别省这个钱，' k" Y# O5 B. l4 [( \
前不久，sigma 做sale, 你可看看如何，

作者: 250286645 时间: 2013-4-17 10:23

你买的一整套里面不是有说明书吗那里面就有怎么配制的啊以前我们用完了原装的都是自己配制的，提取大肠杆菌里面的VEGF和BFGF质粒

作者: mhqh 时间: 2013-4-19 23:07

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说明书里有所有buffer的配方，就是没有buffer ER！郁闷……然后打电话问技术，技术说保密……我都怀疑他们是故意的……为了卖产品……

作者: 250286645 时间: 2013-4-22 10:16

啊不会吧那我也不知道了你就去买现成的算了等这批柱子用完了再换个别的厂家买啊首先问他保密不不保密才买

作者: weiyepan 时间: 2013-4-26 11:28

买离子交换的柱子，重复性好，配方都公开的，内毒素含量低。

作者: wuhuizi 时间: 2013-4-29 22:14

再买一个吧我就是用的QIagen 的endofree maxi kit 不建议自己配即时找到配方还是试剂盒靠谱些

作者: CoolCell 时间: 2013-5-10 19:36

国产的质粒抽提试剂盒也不错啊，也有除内毒素的，性价比不错，可以试试天根或捷瑞

作者: w343989328 时间: 2013-5-10 20:51

人家公司就靠这个赚钱，当然是保密啦。这些buffer有零售的吧

作者: Dancmacabre 时间: 2013-7-23 23:26

我用的是OMEGA

作者: cronos0910 时间: 2013-9-28 01:59

you can try to do cesium chloride gradient mega-prep DNA plasmid purification. you can get the highest quality than any other protocols.

作者: heming 时间: 2013-9-28 09:53

买国产的，要过也可以

作者: heming 时间: 2013-9-28 09:53

效果

作者: chenhuachen 时间: 2013-12-6 17:54

小弟现在做p53对转化细胞代谢的影响，急求TET四环素诱导的wt-p53质粒，对接下来的实验非常重要，跪求论坛里的园友谁有这个质粒，可否赠小弟一点，不胜感激！3 T8 h' n" x7 p# `) U
人的或者大鼠的野生型p53都可以。

作者: yiyi8909 时间: 2014-3-31 11:47

想问下大提质粒不去内毒素转染影响有多大，不用试剂盒怎么去除内毒素？

作者: 石山巨石 时间: 2014-4-1 03:53

本帖最后由石山巨石于 2014-4-1 03:59 编辑 % G* _/ i0 m# y( Z
4 I9 T" o8 x- a& ^
analysis it. you can do it.) c' Y: n4 @9 |9 x
& p: ^9 m) K+ C3 x" E. w% V

作者: 石山巨石 时间: 2014-4-2 11:33

回复 yiyi8909 的帖子/ t8 L, P6 k/ d6 ]2 l
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要看下游做什么如果是要做transfection 给小鼠或者人类细胞内毒会直接KO掉细胞所以需要低内毒

作者: yiyi8909 时间: 2014-4-2 21:00

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谁要转染细胞，这个有什么好的办法去除吗？实验室只有小提的试剂盒

作者: 石山巨石 时间: 2014-4-3 10:38

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详情见另外一个帖子
不过还有一点选vector 在不影响酶切 PCR引物什么后续的步骤之下尽量选效率高的( ]' U) h& T) h$ k( ]) ?
这样下来 eu/mg 由于东西多内毒素平均下来就会低浓度
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如果试剂盒原本设计的就不是endo free 那他试剂可能就会是污染源所以先测试剂可用不可用再说

作者: 碧螺春的秋天 时间: 2014-4-9 09:38

天根的去内毒素试剂盒不错，听好用的

作者: yyyan126 时间: 2014-4-15 08:43

天根的不错，我们都是用天根抽提质粒，然后进行慢病毒包装。

作者: 加菲菲 时间: 2014-4-16 09:48

细菌内毒素概念是1890年的时候提出，1933年最先由小鼠伤寒杆菌提取出来，进行化学免疫方面的研究，到1940年的时候，摩根使用志贺氏菌阐明了细菌内毒素是由多糖、脂质及蛋白质三部分组成的复合体。1950年以后随着科学的进一步发展，其化学结构组成和各种生物活性间的关系也更加明确。
细菌毒素分为外毒素（exotoxin）和内毒素（endotoxin）；外毒素是一种毒性蛋白质，是分泌到菌体外的毒性物质，主要由革兰氏阳性菌等；内毒素是革兰氏阴性菌的细胞壁外壁层上的特有结构，在细菌生活状态时不释放，待死亡自溶或粘附在其它细胞时才表现出其毒性，其主要成分是脂多糖中的类脂A成分。
去除内毒素的方法有超滤膜和荷电微孔滤膜法、石棉及活性炭吸附法、化学降解法、离子交换色谱法、亲和色谱法等。
如果转染细胞，必须要用去内毒素的试剂盒抽提，否则会对细胞有毒性，可以用sigma的去内毒素小提试剂盒，我们实验室比较常用。

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