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干细胞培养污染了吗
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作者:
mayiwaiwai
时间:
2013-4-17 11:43
标题:
干细胞培养污染了吗
本帖最后由 mayiwaiwai 于 2013-4-17 11:52 编辑
# R& Y- V0 ^. G# E( z
+ I1 }* f% t3 J) {2 q& k
最近复苏的干细胞总是这个样子，速度慢，形态还不好，有泡泡的东西在边上，师兄说是不是支原体污染，不知什么原因？
( \4 T+ a* b: A- B' o
无饲养层培养的E14，冻存使用的是90%FBS+10%DMSO。难道是冻存过程中污染掉了吗？
; u, S9 c% Y! W' W6 O
这样的细胞传代过程中，胰酶消化后不是单个细胞，会粘在一起，明显的一块，这是污染的表现吗？
. a9 j& Y/ E# I( P$ ~2 T8 ^
细胞粘附性是降低的，用PBS洗的话就会脱落呢，
" v b0 R- r& y0 U0 L0 n
求指点。。。555
作者:
mayiwaiwai
时间:
2013-4-17 11:47
[attach]51049[/attach][attach]51049[/attach]
! w4 t5 W7 ]" }
作者:
luckywen
时间:
2013-4-17 12:36
复苏细胞黏附抱团现象，细胞不好存活。可以试试用dispase2酶消化，使单个细胞分散开来再接种培养。这个酶相对胰蛋白酶和胶原酶比较温和，对细胞膜损伤小。一般情况下用培养基稀释即可终止反应。
作者:
wf78365421
时间:
2013-4-17 12:38
没有污染。鉴定完毕。
作者:
XIE冬D
时间:
2013-4-17 14:04
我刚开始养的小鼠ES也有这样的情况，大概就是细胞消化过度，及吹打造成机械损伤。我们实验室现在很少使用胰酶消化，除了做原代做feeder。
作者:
mayiwaiwai
时间:
2013-4-17 14:45
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XIE冬D
的帖子
7 ]" H5 W. W# G# r
4 T- O/ Y- @ I) L- o o
这是冻存的细胞出现这样，之前的没有这种情况，虽然也会抱团，但是长出来的形态还是好的，基本2天就要传代的，现在长的好慢，基本要3-4天的样子，做sphere的分化也不好，基本长不出来，就想知道我的细胞肿么啦。。。。。
作者:
mayiwaiwai
时间:
2013-4-17 14:54
[attach]51051[/attach]
# l% b8 L. [ C/ P
附一张冻存之前的ES，冻存后复苏怎么就不行了呢
作者:
mayiwaiwai
时间:
2013-4-17 16:37
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XIE冬D
的帖子
2 T* J1 f# @- z/ p& S3 G/ ^; w5 t$ F1 U
) P% w& P" B- F; s& f- n8 r
还没有传过代，难道是冻存的时候消化过度，或者你说的吹打过度，
作者:
cqstemcell
时间:
2013-4-17 17:06
个人觉得有可能是消化过度造成的。
作者:
sszxlijin
时间:
2013-4-18 21:18
跟楼主养的一样的细胞E14 无滋养层 明胶包被的 最近老分化。看楼主养的挺好，想问问楼主点经验。谢谢
作者:
呼吸
时间:
2013-4-19 08:51
复苏一支细胞，送到检验科检测一下，确定是否污染，然后再进行下一步。
作者:
watchen198891
时间:
2013-4-19 09:37
我觉得是你在复苏的时候，制成细胞悬浮液时机械吹打过度，对细胞造成了损伤，细胞复苏的时候很脆弱，稍微强一些的机械吹打就会造成很大的损伤，就会造成长势很弱。
作者:
mayiwaiwai
时间:
2013-4-19 21:34
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mayiwaiwai
的帖子
j1 e" P3 Y: y8 [) a, D
z, o3 m6 a8 j5 p. Z% e
某种污染，修整中。。。心痛啊。实验啊
作者:
mayiwaiwai
时间:
2013-4-19 21:41
本帖最后由 mayiwaiwai 于 2013-4-19 21:42 编辑
# @8 T* v/ ], T% r/ M
) [/ R/ O, s* B9 p
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sszxlijin
的帖子
" ~1 L& X$ `* k' F
$ |$ T# ]) N D3 l9 B& F
E14培养，培养基中加了2i， 最近出现了问题，具体你可以参考应其龙老师的文章，在我其他的帖子中有的，严谨操作呀，谨慎谨慎
作者:
mayiwaiwai
时间:
2013-4-20 22:20
本帖最后由 mayiwaiwai 于 2013-4-20 22:22 编辑
3 O% K( C" ~ Z4 k2 h( j" ~
; { T* y* w. G, c/ n7 @
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watchen198891
的帖子
! X& x# M8 d; L5 O4 `$ u) J( {* J
- J+ f& g1 i9 s3 j/ w4 X
在3代细胞的边上看着会有絮状的漂浮物，不知从何而来，细胞长的慢，第四代细胞就基本长不起来了，贴壁性也下降，很容易就脱壁。还在找原因，我会再复苏一只试试，谢谢指点。。。
作者:
老姜
时间:
2013-4-21 00:30
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mayiwaiwai
的帖子
5 X& C: P4 i5 C5 ^: I- y' m
- P! B6 F6 b4 x2 `( X
养的什么细胞？形态很像诱导的神经球，是胚胎干细胞吗？
作者:
老姜
时间:
2013-4-21 00:35
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老姜
的帖子
- y) V% i1 \; s
4 y7 L6 \( u! g+ G3 P+ i: f
DMSO可是具有诱导成神经的作用。若养的的胚胎细胞上图更像桑葚胚。若养的是MSC细胞用成神经诱导液就可诱导出这种神经球。
作者:
mayiwaiwai
时间:
2013-4-21 10:20
本帖最后由 mayiwaiwai 于 2013-4-21 10:25 编辑
* _. K% ]7 X1 ] w$ e7 H6 J5 i; H
& d' t! G4 J, \( \. D6 ?) b
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老姜
的帖子
& k. p/ l/ e6 e- X* o
# S6 R, u6 c7 p1 `& L
这是贴壁培养的E14，悬浮培养的细胞球跟这个很像
作者:
老姜
时间:
2013-4-22 00:14
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mayiwaiwai
的帖子
* j4 w; h# e0 n1 S
$ J0 _# L x1 A
Ｅ１４是表示孕１４天胚胎对吗？上一张图细胞团中的细胞状态还不错，一个一个清晰可辨，更像神经球；下一张图的细胞团中已看不出细胞一个一个的状态，可能不行了。桑葚期细胞一个个应该比这种细胞还显透亮。
作者:
sszxlijin
时间:
2013-4-22 00:23
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mayiwaiwai
的帖子
; Y* i# ]) O8 @+ r2 ]$ r
, O3 ~6 A2 {2 Z6 y* a9 w
谢谢
作者:
XIE冬D
时间:
2013-4-22 09:19
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mayiwaiwai
的帖子
8 Y, {# F ]6 r6 Q% o) |* z
`6 C; [9 V8 A; s4 c6 M
或者你可以收集皿里的細胞培養液，做一下支原體檢測，支原體污染是會導致細胞生長緩慢的。
作者:
硕果累累_555
时间:
2013-4-22 09:50
貌似是消化过度造成的哦，吹打要轻柔些，否则压力过大也会致使细胞状态不好的。
作者:
mayiwaiwai
时间:
2013-4-22 16:43
本帖最后由 mayiwaiwai 于 2013-4-22 16:49 编辑
/ m- x- k' d) i' M! j2 l9 _/ Y
' L7 ?4 F; T' |& k" B6 V- T
回复 [url=forum.php?mod=redirect&goto=findpost&pid=846460&ptid=66988]
老姜
的帖子[/u
; ^* |- E3 b& W& t# Y. K! E0 U( ?
具体怎么建立起来的不清楚只知道是细胞系的名字，像R1、D3
作者:
一人日和
时间:
2013-4-23 14:09
最近细胞一直污染，有细菌也有酵母的，这些污染很明显，1天最多2天培养液就浑浊，显微镜下可以看到一层絮状的估计是细菌，成群的小葡萄串就是酵母，支原体的话可以测测外边是看不出来的，就用最简单的PCR方法就可以的。听你的描述应该还是细胞本身的的状态不行，冻存前是不是没消化好呢，细胞那个时候就成团了，里面的细胞复苏回来也死了
作者:
mayiwaiwai
时间:
2013-4-23 22:41
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一人日和
的帖子
6 ~4 e8 p) t& b; Q
' E0 S7 ^- v* f7 T) `9 ?/ y
那些絮状的是会动的，之前没有仔细观察，说明是细菌的污染吧，细菌会从一个孔爬另一个孔么？这次变的严重了，中午复苏的细胞过一下午就可以看的见，是冻存的时候就污染了么？还复苏了之前养的MEF、293也会看到，难道空气传播了么？培养箱之前喷了两天的酒精
作者:
琳茗
时间:
2013-5-8 14:25
无污染，估计是机械吹打过度导致细胞损伤。或者就是消化过度。
作者:
CoolCell
时间:
2013-5-10 14:17
不知道楼主用的什么培养基，是无血清的培养基吗?建议复苏或传代后适量加点血清，对贴壁和终止消化非常好。
作者:
yangcy-smile
时间:
2013-5-14 12:13
你好，我觉得是有分化迹象了。我养的时候也出现过这种情况，克隆很圆很容易漂，有点像EB的感觉。我的感觉是正常生长的胚胎干一般不会很圆，克隆形态没这么标准，个人观点，有不对的地方，大家多指点。
作者:
qq007www
时间:
2013-7-24 16:17
你这个细胞怎么那么散啊，是不是消化过了，或者吹的太散了，应该是一个个细胞团才对，这样细胞长不好正常
作者:
pdongjian
时间:
2013-8-5 10:41
作者:
clayluo
时间:
2013-9-24 13:58
不太像污染，可以多放些图片
) w7 a: W7 u% u5 b% a! K, [
作者:
希望之光
时间:
2013-9-24 22:18
这个我在机械 传代的时候也有出现，一般情况下，多能性状态好的情况下，你在等1-2天，它还是回帖壁的。反之，细胞球发黑，你就扔了吧。消化过头也会导致这个现象，如果是TeSR体系的，你就配套使用最好.如E8你就用货号为15575的EDTA（life technology）来消化，效果极好。good luck。
作者:
jackywangzr
时间:
2013-9-29 08:58
细胞黏附抱团，如果怕污染可以检测一下。。。
作者:
流霞淌
时间:
2013-10-28 15:02
这大小不一致，会不会是做EB的时候细胞悬液没有混匀？
作者:
lasighter
时间:
2014-2-7 16:09
消化过度
作者:
922922922
时间:
2014-2-13 09:24
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mayiwaiwai
的帖子
: i% B4 b: ~5 W: ]6 T7 O" I' \
1 f* h2 [: C/ U
感觉不像是污染，有可能是消化和吹打过度，有时有些分化的也会这样。
作者:
1021618988
时间:
2014-7-14 10:55
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XIE冬D
的帖子
! z/ a. J1 l2 @3 ]
" z- x7 X; Q' w J+ [- n
请问，你们实验室现在不用胰酶消化用什么呢
作者:
neng172
时间:
2015-1-23 17:37
好奇怪的图片 冻存 前后都有嘛 平常的呢
! r, q/ Q4 {6 ^' X* [. Y
作者:
阳光正暖
时间:
2016-4-7 10:26
细胞没污染，应该是冻存时候细胞有损伤，前期细胞状态可能不太好，传代两次看看
作者:
winstonsee
时间:
2016-9-28 16:21
怎么形态不像ES，更像NSC
作者:
15122224893
时间:
2016-9-30 16:12
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mayiwaiwai
的帖子
) b/ ~! s% K. L0 n: P
' m& U, c9 O3 b$ n! U( M
细胞状态不好
作者:
sunxingwang0323
时间:
2016-11-14 13:57
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mayiwaiwai
的帖子
& R2 `6 [, n2 H7 l. I2 J+ N9 E
3 Q: ]7 y' ~4 u5 t0 a3 V
可能是重悬的时候没有吹匀 细胞没有吹开 所以才有细胞团
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