干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 干细胞污染 [打印本页]

作者: mayiwaiwai 时间: 2013-4-25 16:16 标题: 干细胞污染

[attach]51247[/attach]
刚复苏的ES，可以看见这样的死细胞，被细菌侵蚀的，变成空壳，微小的点是可以动的，还会看见细长透明状的，也会动，附着在细胞上，分布在培养基，冻存前细胞是好的，留有一盘继续培养了一段时间，也就是说，要么DMSO污染掉了。要么是冻存管用的时候污染了，另外冻的细胞也会看见这种情况，想请教两个问题：DMSO能被污染吗？有没有同学也遇见这样的污染，像这种细菌在皿和皿之间传染么？

作者: wuhuizi 时间: 2013-4-25 17:44

是不是复苏的时候水浴的时候污染了呢？或者就是冻存的时候i就污染了，细菌复苏能力比细胞强多了。

作者: mayiwaiwai 时间: 2013-4-25 20:17

回复 wuhuizi 的帖子" E, q) N" V0 N& u
( R4 x1 q; E1 q& Y5 @8 r1 G0 N
水浴污染的话细胞应该不是这样子的，起码不会看着像死掉了，这是刚复苏还没有培养的细胞，冻存的时候状态还很好，留着一盘养了很多代的。个人觉得是冻存的过程中出现污染，但是两批都污染就说不过去了。觉得可能是冻存液的问题---DMSO，或者是冻存管

作者: yuhaoze 时间: 2013-4-26 08:01

这是凋亡，细胞凋亡，不是细菌侵蚀的空泡，这样说很不专业。" h. I! v; I& C2 r8 t4 M: h; o
DMSO不会染菌，这么大的毒性，很有可能空气污染。查查支原体吧，冻存前细胞状态好不代表没有污染，如果是真菌或细菌，不会是现在这个样。

作者: mayiwaiwai 时间: 2013-4-26 08:48

回复 yuhaoze 的帖子9 |. `" a j; ^

怎么会凋亡呢，如果继续培养一天的话培养液会变浑浊的，这是刚复的细胞，支原体肉眼不是看不到么，所以就排除了支原体污染。还想着是不是在液氮中污染了呢，但是能在液氮中还存活的细菌应该没有吧。那些会动的不是细菌么？

作者: mayiwaiwai 时间: 2013-4-26 08:49

回复 yuhaoze 的帖子# R% X& [3 z) `% b" e
( ~2 D2 R% P1 W! Y% x7 W4 u) s9 u% S
怎么会凋亡呢，如果继续培养一天的话培养液会变浑浊的，这是刚复的细胞，支原体肉眼不是看不到么，所以就排除了支原体污染。还想着是不是在液氮中污染了呢，但是能在液氮中还存活的细菌应该没有吧。那些会动的不是细菌么？

作者: mayiwaiwai 时间: 2013-4-26 08:49

回复 yuhaoze 的帖子3 t/ f% { T; ?
; ?1 _. |* b: n& U; b
怎么会凋亡呢，如果继续培养一天的话培养液会变浑浊的，这是刚复的细胞，支原体肉眼不是看不到么，所以就排除了支原体污染。还想着是不是在液氮中污染了呢，但是能在液氮中还存活的细菌应该没有吧。那些会动的不是细菌么？

作者: wf78365421 时间: 2013-4-26 10:04

你是说“刚复苏的ES，可以看见这样的死细胞，被细菌侵蚀的，变成空壳，微小的点是可以动的”，我觉得刚刚复苏的细胞，不可能立即污染，“被细菌侵蚀的，变成空壳”，因为细菌增值需要时间的。除非是你冻存之前就是污染的，细胞已经被细菌侵蚀。但如果冻存之前就污染了，那你肯定早就发现了。是不是你复苏的问题?复苏出来的细胞都是死细胞？你有没有测测你复苏细胞的活率？

作者: mayiwaiwai 时间: 2013-4-26 12:28

回复 wf78365421 的帖子

没有测活率，刚复的细胞里看着正常的为数不多，之前也这样继续养过，发现这些东西是不能随着传代换液去掉的，长得慢，贴壁能力下降，PBS洗的话都有可能脱落。分化更是不能做出来。要说复苏的时候出现问题，死的也不会这么快吧，何况那些会动的东西是复苏得来的，应该是和细胞一起冻存啦，困惑的地方在于啥时候变这样的，冻存前是好的，-80待一晚上，就放液氮的，复苏后就这样啦。所以怀疑DMSO和冻存管

作者: lwr002 时间: 2013-4-26 15:17

回复 mayiwaiwai 的帖子0 D5 B, w* c1 U- V

从图片上来看，这不像是污染的细胞，而且就算是污染了，你也不可能复苏以后马上就能看得出来的。刚复苏出来的细胞，还没有贴壁，悬浮的时候是这个状态的。你应该等6个小时后或第二天，细胞贴壁以后再下定论。还有复苏以后最好记一下存活率，你冻存前后都没有测存活率吗？冻存前后，如果怀疑细胞污染的话最好做下无菌检测。DMSO毒性很强，不会被污染的。还有如果每次都这样的话，那是不是考虑下冻存液的配比有没有问题？

作者: wf78365421 时间: 2013-4-26 16:17

本帖最后由 wf78365421 于 2013-4-26 16:19 编辑 ! O( |. l. k3 A. |& w. m; b
' K2 z L s9 W& i9 y
回复 mayiwaiwai 的帖子
" w7 f y* n5 H' W9 G9 p/ ]$ s
1、可以肯定你细胞冻存和复苏是有问题的。复苏后活率不佳。从视野中看，没有几个细胞是透亮的。% O1 f7 T9 U- t- g" v
2、视野下看到会懂得东西未必全是污染。有可能是细胞死亡后的碎片或者其他东西。2 P$ I+ S5 g+ C" U
3、DMSO本身杀菌，是不会生长细菌的。

作者: 加贝 时间: 2013-4-27 08:36

DMSO毒性很大的，怎么可能污染，你是不是加多了啊，细胞受的伤害太大。

作者: yongchen1314 时间: 2013-4-27 11:10

我遇到过类似情况，不是污染

作者: 褚cell 时间: 2013-4-27 11:21

污染是一个方面，解冻后这样，应该是把细胞冻死了。

作者: mayiwaiwai 时间: 2013-4-27 14:56

回复 yongchen1314 的帖子" @& n0 r5 R+ z0 |

那是什么呢，干细胞经不起折腾，这批细胞是不能用了，长不起来

作者: kjeldahl 时间: 2013-4-27 21:12

没有高倍镜的么？贴个高倍的明场的，你这细胞没帖就这样了么？水浴锅干净不。

作者: mayiwaiwai 时间: 2013-4-27 23:22

回复 kjeldahl 的帖子
* |5 a7 h/ ~3 @! t9 F8 R
这是40x的呢，对我们的镜子是最高倍了呢，还没贴壁就这样的，复苏后直接观察的。水浴锅是没有问题的

作者: 前途似锦 时间: 2013-5-2 16:15

这明显是细胞冻死了，换一株吧

作者: mayiwaiwai 时间: 2013-5-7 09:58

回复前途似锦的帖子' Q, b0 N) H4 g' ^* ]4 E% [

冻死了？过期的DMSO有问题么？

作者: mayiwaiwai 时间: 2013-5-7 10:02

回复 yongchen1314 的帖子

请问高手怎么解决的呢？复苏一只别人实验室的细胞株，结果也是这个样子，，传一代就不行了，该注意的地方都注意了的，那些东西又会出现，贴壁不好，长得慢，也去除不掉，差不多12小时换液的，

作者: iytbxxg 时间: 2013-5-7 10:36

从图片上看我都看不出有污染的样子，按你说的应该是冻存和复苏出了问题了。DMSO是绝对不可能有菌的，能在DMSO中生长的生物目前应该还没发现吧，如果复苏出来就发现污染，哪就是冻存前就污染了，DMSO冻存时候保护细胞更保护细菌，你应该冻存前的时候就会发现了。冻存管要是有问题也不会刚复苏就可以看到了吧（相信细菌不是很多）。要是（复苏一只别人实验室的细胞株，结果也是这个样子，传一代就不行了）话，相信是冻存和复苏出问题了，有没有遵守慢冻快融的原则，加入DMSO后有没有放在高于4度的条件下太久了，望指教

作者: iytbxxg 时间: 2013-5-7 10:40

过期的DMSO应该不能用了吧，要不人地就不会给你个保质期了，复苏时在水浴锅时快融时刚好看到没有冰块就要拿出来，并马上进行去DMSO操作，望指教

作者: 琳茗 时间: 2013-5-8 14:02

个人觉得你应该等他贴壁后看细胞状态，如果仍觉得是污染我觉得有几点可能导致：1.此次培液所用的FBS是否有被污染 2.培养箱是否被污染，一般情况是应该定期清理 3. 就是你冻存液没配好，导致你复苏时细胞早已死亡。个人意见哦我们曾今遇到过污染的不过是贴壁后发现有微小的点是可以动的这种状态。

作者: qq007www 时间: 2013-7-24 16:22

你这个真不像污染了，应该是死细胞太多了而已

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)