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标题: 关于干细胞传代的消化方法问题 [打印本页]

作者: 若菲2012 时间: 2013-5-11 18:06 标题: 关于干细胞传代的消化方法问题

想找到诱导多能干细胞消化的时候是用EDTA消化比较好呢？还是用dispase消化比较好呢？两者的优劣在什么地方呀，请大虾指教

作者: mixg699 时间: 2013-5-11 21:47

同问，不知道有没有什么区别，mark

作者: katysong 时间: 2013-5-12 11:07

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EDTA主要是用于鳌合金属离子，真正起作用的是胰酶，一般胰酶的浓度为0.05%就足够了。
而Dispase对细胞的破坏比胰酶的要小，所以在消化干细胞时一般用Dispase（1mg/ml）孵育5-8min，以干细胞刚刚卷边为宜；吹成小块后即可用于传代。

作者: wusetu 时间: 2013-5-12 16:36

EDTA消化比较好

作者: oucflora 时间: 2013-5-12 16:43

EDTA主要是鳌合金属离子，如Ca2+和Mg2+等，这两种离子在细胞连接的形成过程中非常重要，EDTA与胰酶联合作用，可有效的破坏细胞连接，从而使细胞能够分散为单细胞。但EDTA与胰酶联合作用对细胞的损伤比较大；而且温度和血清对胰蛋白酶的活性影响较大。
Dispase是一种非特异性的金属蛋白酶，被用来从各种不同组织或器官中消化细胞外基质，制备原代单细胞、传代培养中的细胞收获或接种转移或者防止悬浮细胞培养时的细胞意外结团。温度和血清等对Dispase影响很小。添加螯合剂或简单稀释就能使其活性大大降低。

作者: wusetu 时间: 2013-5-12 16:51

用胰酶替代品最好:)

作者: CoolCell 时间: 2013-5-12 20:38

用含有EDTA的胰酶消化即可，如果细胞培养在含有血清的培养基中，消化前用PBS冲洗两次，因为如果有残留的血清会使消化不彻底。我们一般0.25%的胰酶37度消化5分钟，用含血清的培养基终止，离心后吹打分散进行传代。或者也可用TrypLE消化，特点是比较温和，而且不需要用血清终止。

作者: chentian820 时间: 2013-5-14 14:17

要具体看你自己的实验目的了。像EDTA和胰酶以及accutase、胰酶替代物之内的消化液能把细胞消化成单细胞。像dispase、胶原酶则是把细胞脱离培养板的平面，并不能把细胞消化成单细胞。
如果只是单纯的传代，用diapase和胶原酶即可。3 k, W+ Z$ X& k2 h, X) f& o4 H
如果是做电转、转染之类的，就用单细胞消化液。
所以不同的实验目的要用不同的消化方法。8 ?' U" T; y b
上述提到的试剂大都不会影响干细胞的状态。但要控制消化时间和消化浓度。

作者: ting1021zhang 时间: 2013-6-4 14:56

干细胞传代的时候，到底是以细胞团还是以单细胞悬液传代啊？刚接触干细胞，不懂啊

作者: 细胞海洋 时间: 2013-6-5 09:37

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