干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 关于二抗IgG、IgM的选择，请问要分亚型吗 [打印本页]

作者: 请叫我晓白 时间: 2013-5-20 15:39 标题: 关于二抗IgG、IgM的选择，请问要分亚型吗

请问如果一抗是小鼠抗大鼠IgM，是否二抗必须选择抗小鼠IgM的二抗？
如果一抗是小鼠抗大鼠IgG1，那二抗需要选择针对IgG1的二抗还是只需要选择抗小鼠IgG就可以了?
有的一抗表明了抗体的亚型，比如IgM、或者IgG1、2等8 u6 a) D) _( u; z+ a J
请问这对选择二抗有什么影响

作者: sun_happone 时间: 2013-5-21 15:10

我也想知道，求高手~~~

作者: xiangyu83 时间: 2013-5-22 08:47

$ k5 E" n4 E3 G) B. T; \
第一个问题：是的。二抗必须指向一抗同型。
第二个问题：一般实验不必区分亚型。IgG类的二抗是通用二抗，可以和各个不同亚型IgG结合。
以下是一些常识（copy）:
二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体.
单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品列表中列出，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM，或是抗小鼠IgG抗体。
如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。) Q% I. f% I! w, s
如果你不知道一抗是哪一类别或亚类，那么抗小鼠IgG是一个不错的选择，因为此种抗体可以识别大多数类型的IgG免疫球蛋白。

作者: 请叫我晓白 时间: 2013-5-22 10:12

回复 xiangyu83 的帖子- B3 O1 H/ ?6 D l# g; K

多谢指导。请问一般来说IgG和IgM哪种抗体效果好一点呢？据说IgG效果更好是吗

作者: xiangyu83 时间: 2013-5-23 01:33

目前绝大多数一抗都是IgG，比较成熟。个人意见，不是实验必须需要，选择IgG的一抗即可。

作者: chutu 时间: 2013-5-23 08:22

本帖最后由 chutu 于 2013-5-23 08:29 编辑
0 F+ G m4 f: {5 F
回复请叫我晓白的帖子

好像楼主开始就把一抗、二抗搞反了。一抗是against某个特定抗原的，一般是单抗，单抗才有分型的说法，多抗里什么类型都有。单抗多数是小鼠来源的，也有大鼠和兔源的。二抗是against一抗免疫球蛋白上的抗原决定簇的，各抗体亚类包含不同的抗原决定簇，所以如果二抗选择单抗，就必须是抗一抗的那种亚类的。但是二抗一般用多克隆抗体血清，因为可以通用，不用管一抗所属的亚类，只要知道哪种动物来源的那类抗体，IgG还是IgM，多克隆抗体血清都有效，可以把其上偶联的荧光分子或显色酶等结合上去

作者: 请叫我晓白 时间: 2013-5-23 12:27

回复 xiangyu83 的帖子: ?) R, Q' [9 V

我目前做荧光双标，必须要小鼠来源的一抗，但搜来搜去就只发现这一种，但是是IgG。不知道染色效果怎么样啊

作者: xiangyu83 时间: 2013-5-25 03:53

回复请叫我晓白的帖子! C. M/ ]9 q0 y
! |" V* f3 K t% \' q- D
不清楚为什么必须用小鼠来源一抗，你的组织或细胞是什么来源的？

作者: 请叫我晓白 时间: 2013-5-25 09:22

回复 xiangyu83 的帖子

大鼠组织。因为我做双标已经买了一种兔来源的一抗了，另外一种只有小鼠的了啊
其他来源的貌似很少啊。有什么办法克服吗？

作者: xiangchou812 时间: 2013-5-25 10:41

还是看一下地板层的回复吧，感觉楼主还是没把一抗二抗搞清楚。一抗是靶向所要研究的组织中的目标抗原的，二抗才是带有荧光标记、与一抗结合的。

作者: xiangchou812 时间: 2013-5-25 10:42

还是看一下地板层的回复吧，感觉楼主还是没把一抗二抗搞清楚。一抗是靶向所要研究的组织中的目标抗原的，二抗才是带有荧光标记、与一抗结合的。

作者: xiangyu83 时间: 2013-5-26 00:44

回复请叫我晓白的帖子7 _& [, Y9 y3 y( h v, S: V- H/ s
! H/ K3 x- j9 v4 ]8 [1 d" E
一抗来源是兔和小鼠，那么你二抗分别选择抗兔和抗小鼠的就可以了吧，两个二抗分别标记不同颜色荧光。两个一抗可以同时孵育也可以分别孵育，需要摸索条件。经验是特异性结合能力弱的先孵育，再加特异性结合能力强的一抗。二抗一般不需要分开孵育。

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)