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标题: MEF为何要用mc处理？目的和作用是什么 [打印本页]

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作者: lmh_yixue    时间: 2013-5-27 13:55     标题: MEF为何要用mc处理？目的和作用是什么

MEF为何要用mc处理？目的和作用是什么

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作者: 微笑流滢    时间: 2013-5-27 14:44

用丝裂霉素C处理后，MEF细胞就变成了Feeder，就可以用来培养ES细胞，处理后，细胞就不能再增殖了。

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作者: sun_happone    时间: 2013-5-27 15:43

MEF经过mmc处理后，就不再增殖，其存在的作用是作为细胞的滋养层，其分泌的因子有助于细胞的生长。

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作者: Andyhigh    时间: 2013-5-27 16:26

回复 sun_happone 的帖子; t+ i1 K& W4 b& @% Q
. D0 t1 s/ R. w8 W2 f3 S! V& B

: H- ~' w; v6 S/ Q最近看到些关于饲养层方面的问题，有些疑问:8 {, @" C- E1 y+ T

7 Z8 f9 g9 ]- }1.考虑到物种进化的差异性，由同源饲养层细胞释放的某些因子更有利于与该物种多能性细胞上的受体结合，进而更好地促进细胞的增值。-理论上讲
- ]- H, S' }8 ]( V' o/ }
( A: G- l, d$ [2 W7 n  }但事实上，猪的iPSCs细胞是在灭活的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）上增值的。并且有文献指出，猪的胚胎成纤维细胞和猪的子宫细胞并不能维持猪的多能性细胞的生长。这又是为什么呢？？？6 r+ w9 ~% Y. P& ^
6 n* Z  ~  D+ v
2.MEF一定优于STO嘛？ 这个是已经得到的结论嘛,还是要根据试验目的。  , k+ o( b7 k4 S' W1 S5 C2 N

. w. S( G& d( C' V  m3.猪的iPSCs能在活的MEF上增值嘛？如果不能，为什么灭活处理后，就能增值了呢？
3 |5 \/ B. ~- V( u
3 q' B9 K7 E4 d& ]  q( g. q0 |) O# A) e+ i
能帮我回答下嘛？？？

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作者: lmh_yixue    时间: 2013-5-27 21:34

回复 sun_happone 的帖子$ t3 x8 @3 N1 `# v( y
# R+ n6 ~) b5 a1 y9 d) @' S
那么如果把MEF种在transwell上，使MEF和ES共培养，它分泌的因子是否会影响ES有助于ES生长？还是因为mef和ES接触有利于ES生长呢？

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作者: sirius_zou    时间: 2013-5-28 13:10

Andyhigh 发表于 2013-5-27 16:26 / i2 ?5 `$ G5 L) K) ?6 C4 ?4 ?) C8 w
回复 sun_happone 的帖子

4 o: \" C  T! p& s; T
我来回答第3问
7 Z* _. D' i$ ]1 ]$ a1 u2 jmmc作用不是灭活，只是抑制MEF的分裂而已，但MEF细胞仍然会长大变长。$ U# {) }  z; X- e: q7 C
若MEF不经过mmc处理，直接培养ips的话，得出的结果是MEF生长速度快于ips，最后MEF完全占据培养空间，ips不会养的好

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作者: qiushuiwuhen    时间: 2013-5-28 17:03

回复 sirius_zou 的帖子
% J6 c# s" ]$ h% k& q( g% ]0 G' `9 v7 Z4 B  F5 F
很同意你的说法，分析的很到位，同时用丝裂霉素处理的话，一定要注意按照细胞的密度计生长状态进而决定灭活de时间，一般密度不错的话，灭火2.5h,但是如果密度差的话，尽量减少灭火的时间，并且如果灭火的mef不作为饲养层使用的话，还可以做条件培养基使用。

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作者: sun_happone    时间: 2013-5-29 15:12

回答5楼的问题：共培养一共有三种，1、用培养过某一细胞的培养基即（condition meium)培养另一细胞，2、就如你说的transweill板，把细胞养在上下两室3，直接混合，三种方法当然最后一种接收的因子更多啦，当然不同实验可能要用不同的方法，不能说谁优谁劣。个人意见哈

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作者: Andyhigh    时间: 2013-5-29 18:39

回复 sirius_zou 的帖子0 U9 _+ y+ Y3 X
  x0 q8 P5 h+ G, _+ `7 Q
原来是这样的，谢谢啊

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作者: Andyhigh    时间: 2013-5-29 18:41

回复 sun_happone 的帖子
$ ~6 D& v' i7 ?3 O" m0 b
' r' N! i& x$ k# a) d4 p受教了···

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作者: 细胞海洋    时间: 2013-5-30 09:25

回复 sun_happone 的帖子
! w& n3 }. F& X/ D1 n! c; ]% d" r" z8 T# Q% q
你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样0 l& G/ H/ y  T2 x- g
, |; }- ^: l& p/ x  t
否则他会看不到

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作者: 欢乐桥    时间: 2013-6-1 18:40

MMC直接加到MEF的培养基里吗？终浓度是多少？作用多长时间呢？

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作者: zhusealin    时间: 2013-6-4 15:15

MEF也会分泌一些细胞外基质（ECM），有利于ES的贴壁

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作者: BDFCM    时间: 2013-6-6 16:48

回复 lmh_yixue 的帖子
' B, F: a! O4 x+ ^
2 L( H5 k  N/ \% Y& j  k7 E* u0 _我认为，MEF的作用主要有两方面：1）其分泌的因子维持了多能干细胞的多能性状态（当然还要加lif或bFGF）；2）MEF分泌的细胞外基质成分，促进了ES的贴壁生长" {+ Y0 W$ f* r
我做过mES的无FEEDER培养，是在培养皿包被明胶，用MEF condition medium加双倍的LIF来样的，ALP和IF鉴定多能性marker均为阳性。

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