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标题: 急求WB条带分析 [打印本页]

作者: angelyannan 时间: 2013-5-28 16:21 标题: 急求WB条带分析

本人提取的神经干细胞总蛋白，显的是p JNK，原本大家不都是46kd和54kd的两条带子么？我的根据maker来看最上面的是大概在54kd和46kd的位置，可是怎么下面还有两条？其中中间的两条挨得还很近，最下面的一条还比其他的都亮！本人用的是CST的抗体。谢谢帮忙分析！

作者: shuixiao 时间: 2013-5-28 20:22

可能的原因会有很多，比如说样品分解了，抗体特异性差，实验本身条件有问题等。
可以做个内参看看是不是样品分解，或者换一个品牌的抗体试试，看看是不是抗体的原因。如果有单抗的话，建议使用单抗。孵育抗体还是建议在4℃下，摇床上孵育过夜（速度不要太快，如果是非圆周转动的上下摆动的摇床最好，这样可以减少非特异的结合）。. b/ c# i7 F: k7 Q3 x
我对p JNK不了解，所以只是从做WB的本事去分析原因，分析的不到位的原因还请海涵。

作者: angelyannan 时间: 2013-5-29 07:44

回复 shuixiao 的帖子

谢谢帮忙分析，不过如何通过内参确定样本是否分解呢？我在strip过后，孵了actin作为内参，actin还是和之前做的一样，不叫均一的一条带子，没有杂带~

作者: 晴斗斗 时间: 2014-5-16 14:52

那估计是抗体问题吧，稀释倍数不对什么的，可以标二抗的时候加点脱脂奶，看看能消除杂带么？

作者: naturehu 时间: 2015-1-15 22:06

1.多克隆抗体，抗体的特异性较差；8 U; a3 L5 f/ U3 c% d6 |+ r
2.调整抗体浓度，降低1抗浓度试试；; F g- [9 ~' P
3.延长封闭时间；
4.发现新的亚型，^_^。

作者: cellprobe 时间: 2017-3-27 02:30

本帖最后由细胞海洋于 2017-3-27 15:42 编辑

WB有杂带有多种原因的：

样品分解，一抗特异性不好或者浓度太高，PVDF膜封闭不够彻底，抗体没有四度过夜，或者上样品太高等

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