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标题:
脐带间充干细胞为什么看起来细胞很大
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作者:
yeahjl
时间:
2013-5-31 09:24
标题:
脐带间充干细胞为什么看起来细胞很大
我刚开始养脐带间充质干细胞,发现细胞养出来比骨髓的大很多,而且很乱,形态不好,麻烦各位高手给指点一下,小妹不盛感激![attach]52330[/attach]
作者:
小公
时间:
2013-5-31 09:35
形态很好啊,几天了
作者:
zh116z
时间:
2013-5-31 10:46
细胞看起来有些不干净,是刚分离的吗?
作者:
cantonchn
时间:
2013-5-31 12:03
还不错的嘛~~~
作者:
deshenglll
时间:
2013-5-31 12:09
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yeahjl
的帖子
& z& E! Y. T( s1 j# D
9 B: F7 x8 l9 R) i
是厡代的细胞么?细胞是有些大,密度比较低,细胞之间的接触距离比较远,细胞会比较大,等传代后再看看。
作者:
yiyeqiu
时间:
2013-5-31 15:28
个人看起来觉得情况不妙,细胞形态不一,有些那么长,而有些显得粗短,长势快不快?
作者:
yeahjl
时间:
2013-5-31 16:04
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小公
的帖子
$ U1 E3 h8 \& m& x
3 ^2 Q b6 n1 A/ z
这是原代的第14天的细胞
作者:
yeahjl
时间:
2013-5-31 16:06
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zh116z
的帖子
- @ w$ f' J7 i/ ]
- X5 z+ \% x8 x( `# P8 o$ ]
是的,养了14天了,首次全量换,之后每3到4天换,细胞很多聚集成团的,不均匀,这是长得好的一片
作者:
yeahjl
时间:
2013-5-31 16:08
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deshenglll
的帖子
9 z0 {% Q" y% S8 H+ S/ Q. k
, H' l, J5 Y$ V ?' E7 f
现在已经传到第2代了,细胞是小一些,但还是相对大,很多杂细胞,一般第二代几天可以传代呢,我的长了一周了还不见怎么长,求助,谢谢
作者:
yeahjl
时间:
2013-5-31 16:17
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yiyeqiu
的帖子
8 x8 \) K; ~& X$ Z% v
3 ~' e6 [/ H1 |9 {7 a" H% i, ?' ~
是吗?求解释,14天原瓶传代的,因为有几片细胞聚集很明显,但是整瓶细胞又不多,现在传代后一周了,长得很慢
作者:
yeahjl
时间:
2013-5-31 16:20
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cantonchn
的帖子
& Z: ^( ?# X" N$ Z& g
5 r9 E( D" n0 Q7 }8 J$ F. G+ l
谢谢,但是怎么可以养的好看一些呢,是不是3-4天换液太频繁呀?细胞不怎么长
作者:
Tim
时间:
2013-5-31 16:39
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yeahjl
的帖子
& l, W( v/ G4 ~1 m
( q$ g, {& c9 I# Q; |
形态有些差!你这是几代的呢??密度有点低?建议直接换小瓶养吧!
作者:
jack1381818
时间:
2013-5-31 17:04
個人覺得可能因繼代時團塊未均勻打散'所以易產生大小不一現象'所以有的過於老化凋亡漂浮狀況
4 l3 J/ _3 ?) Y5 Y! c( ]" e' v Y F
作者:
yeahjl
时间:
2013-5-31 18:32
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Tim
的帖子
. p1 y0 n: }* R$ X$ H4 q
' @! g# \6 q, r8 Z8 X' @
第一代,
作者:
mania7041
时间:
2013-6-3 08:26
脐带间充质干细胞本来就程不规则三角形或梭形,也比较大,一般养到12天左右就要传代了,你的细胞貌似还很少,看看是不是培养基的生长因子不足了,你用的是什么培养基:PBS+DMEM还是无血清的培养基很重要,前者的细胞较大些,后者会小
作者:
deshenglll
时间:
2013-6-3 10:08
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yeahjl
的帖子
8 I% G# b. l$ O- A3 s: C# H
$ L1 W9 q8 @3 N" N
14天了才这么少啊,我们做生产的一般12天可以冻存了。你说杂细胞多是你的分离方法的问题。我们一般传代后2天左右就可以再传代了。你先看你的细胞数是多少吧,以数量说话。
作者:
yiyeqiu
时间:
2013-6-3 16:28
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yeahjl
的帖子
5 y7 N( I( N7 ]* m6 s
0 X8 I/ o' ]0 H
十四天才长成这个密度啊?长得很慢哦,我养过原代脐带血间充知干细胞复苏后1-4代按照1:4传都是三天这个样子就能传代了,而且细胞长得均匀整齐,但是到了六七代之后,长势就会变慢了,细胞形态也开始变得大小长短不一,还会成团扎堆生长,不懂是不是要分化了
作者:
yeahjl
时间:
2013-6-3 17:29
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mania7041
的帖子
( I" R L5 ~6 f1 s" k Z/ T
6 D- D6 k1 d! E1 m. D
用的低糖DMEM,10%血清的,你们加什么细胞因子了呀?
作者:
yeahjl
时间:
2013-6-3 17:31
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deshenglll
的帖子
! Y0 I& Y2 ]; c9 p
5 D$ v6 s2 X. ?) `( B" @" r
你们的培养基成分是什么呀,加因子了吗?还是?
作者:
zsc78
时间:
2013-6-3 21:43
原代是这样不太好,这一片的细胞有些分化,估计不能传几代。
作者:
yeahjl
时间:
2013-6-4 10:30
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zsc78
的帖子
3 a9 a5 j) X2 X5 N T/ Y
/ X" p0 a7 [. v6 o3 P" x+ F: `
O(∩_∩)O谢谢
作者:
孙帅帅
时间:
2013-6-4 10:50
个人感觉细胞状态不是很好,曾经我们也遇到过状态不好的脐带原代,也是十四天才长出几团细胞,消化传代后,p1细胞形态有点大,老化的很厉害,直接不养了~~
作者:
孙帅帅
时间:
2013-6-4 10:51
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yeahjl
的帖子
9 [ V, A; a" L/ q/ V2 s
; z) ~ A0 D5 I8 a; ~
当细胞有80-90%融合时候赶紧传代,避免细胞接触抑制,产生毒素,使细胞凋亡或老化。
作者:
deshenglll
时间:
2013-6-4 13:47
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yeahjl
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3 c. V, B. h0 Q# `( Z: w7 J
7 M' x o9 K j3 X3 b
加了。FGF
作者:
ruofan1982
时间:
2013-6-5 11:04
细胞看上去有点老了,形态不是很好看。原因可能是分离细胞接种的密度比较低,细胞生长慢,养了14天就老了。建议下次密度要提高。
作者:
yeahjl
时间:
2013-6-5 11:08
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ruofan1982
的帖子
9 F' ?3 f6 }: {* L' _9 z7 v9 F
. h B3 s! J6 i6 H$ M- d
用的组织块法,那么就提高组织块的密度吗?
作者:
yeahjl
时间:
2013-6-5 11:08
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ruofan1982
的帖子
- n" G- K5 v7 ^" }" ]) l3 T
# g7 x# B' j0 _; p$ L$ p$ B; _$ `
用的组织块法,那么就提高组织块的密度吗?
作者:
ruofan1982
时间:
2013-6-5 11:22
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yeahjl
的帖子
" K. l8 O- H3 I1 V5 |2 C; ^
k0 i$ z& i, r. h) V( n; V
对,提高密度试试
作者:
mania7041
时间:
2013-6-5 11:30
如果是用DMEM+10%血清的话,可能还要加入部分的因子2(L谷氨酰胺,提供能量的)和因子1,这样培养出来的细胞一般的状态和标志都是很好的
作者:
CELL007
时间:
2013-6-5 16:19
培养基要加谷氨酰胺和HEPES吧,还要加些细胞因子的,如bFGF
作者:
yeahjl
时间:
2013-6-7 18:01
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CELL007
的帖子
# g/ q9 X+ t7 V* M4 | }# ^( J
! R1 y2 y/ b2 d0 L" Y3 L
好的,刚好我的因子到了,准备尝试一下,O(∩_∩)O谢谢
作者:
yeahjl
时间:
2013-6-7 18:01
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CELL007
的帖子
' R, E# _1 `( ~# g2 ^
4 `# V$ V6 i; @( ~# j
好的,刚好我的因子到了,准备尝试一下,O(∩_∩)O谢谢
作者:
tonyww723
时间:
2013-7-12 01:31
楼主分离组织的时候是怎么分的啊?如果直接是用酶消化的脐带内壁,分离出来的大部分可能都是HUVECs,内皮祖细胞。不过看着照片,应该还好,得注意原代细胞的接种密度,建议用孔板养原代细胞。要想得到纯度比较高的原代细胞,建议还是挑单克隆,然后进行96空板进行培养,数量上来后,进行表型和体外分化分析,这样虽然费事,但是毕竟结果自己心里有数
作者:
deshenglll
时间:
2013-7-12 10:52
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yeahjl
的帖子
* X, [% W- s% }; w [- S
' R; m: I; z% |- F# K
细胞形态还好啊
作者:
孙帅帅
时间:
2013-7-12 11:28
感觉 细胞有点长,折光度还比较不错,但是培养基里面漂浮着好多死细胞!个人认为细胞状态不是很好! 请问你是怎么处理的原代?处理原代7~8后换液!~~
作者:
xingyuncao
时间:
2013-7-12 17:14
细胞形态不好,可能是因为密度太低,可以消化下来接种到面积小点的培养瓶或者孔板里试试
作者:
get0715
时间:
2013-7-12 17:19
原代细胞形态不均一是正常的,每次传代后就是纯化的过程。传代后增殖较慢,其中比较重要的原因是接种密度低,如果能控制在72小时左右就传代是最好的了。
作者:
piano尤尤
时间:
2013-7-18 15:22
我觉得有点老态了 而且原代传代最好不要超过十四天
作者:
daiying5200000
时间:
2013-7-18 16:04
有时候细胞密度不够细胞长的慢,你用的培养基是进口的么?
作者:
yeahjl
时间:
2013-7-18 20:52
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daiying5200000
的帖子
! x I2 Q7 _* A) k+ c
4 R" F% E/ s5 X$ R+ M
我现在也觉得我的细胞培养基不行了,不是进口的,是Hyclone的,50元一瓶的那种,请问你的觉得哪种培养基比较好用呢?O(∩_∩)O谢谢
作者:
daiying5200000
时间:
2013-7-19 08:29
普通的我们用的life的gibco,干细胞培养我们用的stemcell公司的,血清都是用进口的,无血清培养用的KSR
作者:
yeahjl
时间:
2013-7-19 11:04
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daiying5200000
的帖子
+ ?4 P# M$ S" \) ^/ y% v; J
6 i+ q( |" ?2 V& e) x, h
好的,我觉得你们都用的好好呀,我们都是三思而后行~~~
作者:
daiying5200000
时间:
2013-7-19 11:27
做细胞实验就得烧钱,好结果才能出好文章,才能得到基金继续研究啊,呵呵
作者:
18943340581
时间:
2013-7-26 21:38
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yeahjl
的帖子
; h9 x M8 c5 D. H! L( C: C! T
( W" I" n# j! C c
传代的密度要在8000-10000,一般3天融合度就能达到80%了,按照这个密度传代细胞的状态会很好
作者:
pdongjian
时间:
2013-8-5 16:10
作者:
沙漠狐o0
时间:
2013-8-6 13:33
换更好的培养基吧。。。
8 s8 R2 Z5 L- [9 W. H4 Y
一般第5天、第8天的时候换液,然后过2~3天就可以传代了。。。
* j- M+ G% ]9 ]/ d4 Q6 Y& j" z, s
组织块接种:0.5g/T75培养瓶。。。
作者:
deshenglll
时间:
2013-8-6 14:27
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yeahjl
的帖子
2 B2 u4 t- v6 A0 c
; T6 l, [, u8 _- F" Y; @* _/ Z
挺好的。细胞刚出来的就时候就是这样的。
作者:
avbn
时间:
2013-8-12 15:30
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yeahjl
的帖子
1 V% A! a2 {: c9 B" B
6 V9 R6 P! E. X- F7 N" ?- r
细胞状态不是很好,建议多做几批试试,适当提高接种密度
作者:
wangbo19880315
时间:
2013-8-27 10:15
细胞接种密度过小,原代培养时间过长,这种细胞不算乱,铺满形态就会好的!
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