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标题:
脐带间充干细胞为什么看起来细胞很大
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作者:
yeahjl
时间:
2013-5-31 09:24
标题:
脐带间充干细胞为什么看起来细胞很大
我刚开始养脐带间充质干细胞，发现细胞养出来比骨髓的大很多，而且很乱，形态不好，麻烦各位高手给指点一下，小妹不盛感激！[attach]52330[/attach]
作者:
小公
时间:
2013-5-31 09:35
形态很好啊，几天了
作者:
zh116z
时间:
2013-5-31 10:46
细胞看起来有些不干净，是刚分离的吗？
作者:
cantonchn
时间:
2013-5-31 12:03
还不错的嘛~~~
作者:
deshenglll
时间:
2013-5-31 12:09
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yeahjl
的帖子
6 L+ a3 ]. @, ?+ ]6 S
a; r p- e( c& a* \
是厡代的细胞么？细胞是有些大，密度比较低，细胞之间的接触距离比较远，细胞会比较大，等传代后再看看。
作者:
yiyeqiu
时间:
2013-5-31 15:28
个人看起来觉得情况不妙，细胞形态不一，有些那么长，而有些显得粗短，长势快不快？
作者:
yeahjl
时间:
2013-5-31 16:04
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小公
的帖子
8 b& C, z& `% m. g7 i0 O5 q$ B
9 A1 e/ {4 B2 e Q3 T/ `9 Q
这是原代的第14天的细胞
作者:
yeahjl
时间:
2013-5-31 16:06
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zh116z
的帖子
% L- P& s" l+ Y c1 W; I
# C: N* }+ f' Y2 Y' B$ ]/ ~) v! ]( c
是的，养了14天了，首次全量换，之后每3到4天换，细胞很多聚集成团的，不均匀，这是长得好的一片
作者:
yeahjl
时间:
2013-5-31 16:08
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deshenglll
的帖子
! s9 m! o/ s9 P4 k7 q% r5 l
. m3 {+ v* _. z) i: }5 E" I
现在已经传到第2代了，细胞是小一些，但还是相对大，很多杂细胞，一般第二代几天可以传代呢，我的长了一周了还不见怎么长，求助，谢谢
作者:
yeahjl
时间:
2013-5-31 16:17
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yiyeqiu
的帖子
( r4 V' P# t W( F
8 d3 p9 k$ O2 W' j$ t+ ]% H
是吗？求解释，14天原瓶传代的，因为有几片细胞聚集很明显，但是整瓶细胞又不多，现在传代后一周了，长得很慢
作者:
yeahjl
时间:
2013-5-31 16:20
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cantonchn
的帖子
; I# f; H5 j3 n0 [! x
% {) E) t, X, y
谢谢，但是怎么可以养的好看一些呢，是不是3-4天换液太频繁呀？细胞不怎么长
作者:
Tim
时间:
2013-5-31 16:39
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yeahjl
的帖子
: h- t2 n7 K" z- m/ N7 y- w
3 [- K) R2 @& S% ^% Q* S
形态有些差！你这是几代的呢？？密度有点低？建议直接换小瓶养吧！
作者:
jack1381818
时间:
2013-5-31 17:04
個人覺得可能因繼代時團塊未均勻打散'所以易產生大小不一現象'所以有的過於老化凋亡漂浮狀況
2 a9 K/ f7 `# B6 c
作者:
yeahjl
时间:
2013-5-31 18:32
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Tim
的帖子
; g/ s& ]# c! V
+ c" t) ^( k7 L3 Q" z6 p3 @
第一代，
作者:
mania7041
时间:
2013-6-3 08:26
脐带间充质干细胞本来就程不规则三角形或梭形，也比较大，一般养到12天左右就要传代了，你的细胞貌似还很少，看看是不是培养基的生长因子不足了，你用的是什么培养基：PBS+DMEM还是无血清的培养基很重要，前者的细胞较大些，后者会小
作者:
deshenglll
时间:
2013-6-3 10:08
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yeahjl
的帖子
( x+ M: U5 V: r$ E- S
+ o9 O+ K/ W( n t2 T
14天了才这么少啊，我们做生产的一般12天可以冻存了。你说杂细胞多是你的分离方法的问题。我们一般传代后2天左右就可以再传代了。你先看你的细胞数是多少吧，以数量说话。
作者:
yiyeqiu
时间:
2013-6-3 16:28
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yeahjl
的帖子
' K7 ?% T3 P: _: t! b) w* ?- h1 p
0 A4 R# t( O* W5 d& ?# e
十四天才长成这个密度啊？长得很慢哦，我养过原代脐带血间充知干细胞复苏后1-4代按照1：4传都是三天这个样子就能传代了，而且细胞长得均匀整齐，但是到了六七代之后，长势就会变慢了，细胞形态也开始变得大小长短不一，还会成团扎堆生长，不懂是不是要分化了
作者:
yeahjl
时间:
2013-6-3 17:29
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mania7041
的帖子
3 Z V. d% k% S- j0 @8 P
1 ^1 _# r: a/ y' O
用的低糖DMEM，10%血清的，你们加什么细胞因子了呀？
作者:
yeahjl
时间:
2013-6-3 17:31
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deshenglll
的帖子
: m" A7 u7 B' X" g% Z: o/ e
1 I2 d$ n, c" R. C
你们的培养基成分是什么呀，加因子了吗？还是？
作者:
zsc78
时间:
2013-6-3 21:43
原代是这样不太好，这一片的细胞有些分化，估计不能传几代。
作者:
yeahjl
时间:
2013-6-4 10:30
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zsc78
的帖子
+ s* x+ L2 P4 G! Y$ l
/ D; E3 J/ q5 A C5 A; a- d
O(∩_∩)O谢谢
作者:
孙帅帅
时间:
2013-6-4 10:50
个人感觉细胞状态不是很好，曾经我们也遇到过状态不好的脐带原代，也是十四天才长出几团细胞，消化传代后，p1细胞形态有点大，老化的很厉害，直接不养了~~
作者:
孙帅帅
时间:
2013-6-4 10:51
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yeahjl
的帖子
) u+ _% G0 l% @) v& Q
/ w k8 G* d4 q% @; _
当细胞有80-90%融合时候赶紧传代，避免细胞接触抑制，产生毒素，使细胞凋亡或老化。
作者:
deshenglll
时间:
2013-6-4 13:47
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yeahjl
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! P# {( s8 }- o' S) z
3 g% o6 d- h* E! B% K9 z, y
加了。FGF
作者:
ruofan1982
时间:
2013-6-5 11:04
细胞看上去有点老了，形态不是很好看。原因可能是分离细胞接种的密度比较低，细胞生长慢，养了14天就老了。建议下次密度要提高。
作者:
yeahjl
时间:
2013-6-5 11:08
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ruofan1982
的帖子
( _. z3 Y. ]5 Z# Y3 h2 w( {0 }4 m$ V
4 g( f. S5 R r$ z3 c
用的组织块法，那么就提高组织块的密度吗？
作者:
yeahjl
时间:
2013-6-5 11:08
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ruofan1982
的帖子
( c8 E2 j( I6 B+ E) x: B$ A/ @
, X. O+ @& k' ^8 V5 w: c
用的组织块法，那么就提高组织块的密度吗？
作者:
ruofan1982
时间:
2013-6-5 11:22
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yeahjl
的帖子
* ?$ o/ F" k9 `
9 j# S* T' ^8 P$ v- H" l
对，提高密度试试
作者:
mania7041
时间:
2013-6-5 11:30
如果是用DMEM+10%血清的话，可能还要加入部分的因子2（L谷氨酰胺，提供能量的）和因子1，这样培养出来的细胞一般的状态和标志都是很好的
作者:
CELL007
时间:
2013-6-5 16:19
培养基要加谷氨酰胺和HEPES吧，还要加些细胞因子的，如bFGF
作者:
yeahjl
时间:
2013-6-7 18:01
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CELL007
的帖子
; W0 y, P8 |# W1 G3 m5 i
6 z! x3 a( w/ G
好的，刚好我的因子到了，准备尝试一下，O(∩_∩)O谢谢
作者:
yeahjl
时间:
2013-6-7 18:01
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CELL007
的帖子
& u' |9 z' e3 W0 H8 s, `8 t
1 X' l+ _. y* s1 g- T
好的，刚好我的因子到了，准备尝试一下，O(∩_∩)O谢谢
作者:
tonyww723
时间:
2013-7-12 01:31
楼主分离组织的时候是怎么分的啊？如果直接是用酶消化的脐带内壁，分离出来的大部分可能都是HUVECs，内皮祖细胞。不过看着照片，应该还好，得注意原代细胞的接种密度，建议用孔板养原代细胞。要想得到纯度比较高的原代细胞，建议还是挑单克隆，然后进行96空板进行培养，数量上来后，进行表型和体外分化分析，这样虽然费事，但是毕竟结果自己心里有数
作者:
deshenglll
时间:
2013-7-12 10:52
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yeahjl
的帖子
. c5 [/ u1 c: g' M4 R9 z9 z0 ?$ F
% h( H1 K; x+ r3 p6 a6 u
细胞形态还好啊
作者:
孙帅帅
时间:
2013-7-12 11:28
感觉 细胞有点长，折光度还比较不错，但是培养基里面漂浮着好多死细胞！个人认为细胞状态不是很好！ 请问你是怎么处理的原代？处理原代7~8后换液！~~
作者:
xingyuncao
时间:
2013-7-12 17:14
细胞形态不好，可能是因为密度太低，可以消化下来接种到面积小点的培养瓶或者孔板里试试
作者:
get0715
时间:
2013-7-12 17:19
原代细胞形态不均一是正常的，每次传代后就是纯化的过程。传代后增殖较慢，其中比较重要的原因是接种密度低，如果能控制在72小时左右就传代是最好的了。
作者:
piano尤尤
时间:
2013-7-18 15:22
我觉得有点老态了 而且原代传代最好不要超过十四天
作者:
daiying5200000
时间:
2013-7-18 16:04
有时候细胞密度不够细胞长的慢，你用的培养基是进口的么？
作者:
yeahjl
时间:
2013-7-18 20:52
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daiying5200000
的帖子
/ r B/ `! K8 ]4 F2 J' E
0 B$ z3 O0 E$ X/ g N
我现在也觉得我的细胞培养基不行了，不是进口的，是Hyclone的，50元一瓶的那种，请问你的觉得哪种培养基比较好用呢？O(∩_∩)O谢谢
作者:
daiying5200000
时间:
2013-7-19 08:29
普通的我们用的life的gibco，干细胞培养我们用的stemcell公司的，血清都是用进口的，无血清培养用的KSR
作者:
yeahjl
时间:
2013-7-19 11:04
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daiying5200000
的帖子
( }& c7 W4 q5 X+ x( Z) \" H+ v
* ]3 J5 o5 u k+ R& B4 f2 U
好的，我觉得你们都用的好好呀，我们都是三思而后行~~~
作者:
daiying5200000
时间:
2013-7-19 11:27
做细胞实验就得烧钱，好结果才能出好文章，才能得到基金继续研究啊，呵呵
作者:
18943340581
时间:
2013-7-26 21:38
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yeahjl
的帖子
* a4 \! ~: \! f* F5 _
& Z1 Q3 u3 p+ `- t$ c$ p
传代的密度要在8000-10000，一般3天融合度就能达到80%了，按照这个密度传代细胞的状态会很好
作者:
pdongjian
时间:
2013-8-5 16:10
作者:
沙漠狐o0
时间:
2013-8-6 13:33
换更好的培养基吧。。。
6 Q6 R$ _- r2 `6 P: }
一般第5天、第8天的时候换液，然后过2~3天就可以传代了。。。
& |% f% z# E, B, q+ G8 i% Q
组织块接种：0.5g/T75培养瓶。。。
作者:
deshenglll
时间:
2013-8-6 14:27
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yeahjl
的帖子
3 x4 @2 d' W8 {( G" I2 J% g
' h2 z1 S; }3 e# e
挺好的。细胞刚出来的就时候就是这样的。
作者:
avbn
时间:
2013-8-12 15:30
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yeahjl
的帖子
7 a% V! h P6 t6 M) j
9 u3 k% ?: S% n8 _' [! F
细胞状态不是很好，建议多做几批试试，适当提高接种密度
作者:
wangbo19880315
时间:
2013-8-27 10:15
细胞接种密度过小，原代培养时间过长，这种细胞不算乱，铺满形态就会好的！
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