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标题: 脐带间充干细胞为什么看起来细胞很大 [打印本页]

作者: yeahjl 时间: 2013-5-31 09:24 标题: 脐带间充干细胞为什么看起来细胞很大

我刚开始养脐带间充质干细胞，发现细胞养出来比骨髓的大很多，而且很乱，形态不好，麻烦各位高手给指点一下，小妹不盛感激！[attach]52330[/attach]

作者: 小公 时间: 2013-5-31 09:35

形态很好啊，几天了

作者: zh116z 时间: 2013-5-31 10:46

细胞看起来有些不干净，是刚分离的吗？

作者: cantonchn 时间: 2013-5-31 12:03

还不错的嘛~~~

作者: deshenglll 时间: 2013-5-31 12:09

回复 yeahjl 的帖子8 R! J$ u8 b2 R5 i, G$ b6 e
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是厡代的细胞么？细胞是有些大，密度比较低，细胞之间的接触距离比较远，细胞会比较大，等传代后再看看。

作者: yiyeqiu 时间: 2013-5-31 15:28

个人看起来觉得情况不妙，细胞形态不一，有些那么长，而有些显得粗短，长势快不快？

作者: yeahjl 时间: 2013-5-31 16:04

回复小公的帖子; i+ S" g5 M |5 T. h# J

这是原代的第14天的细胞

作者: yeahjl 时间: 2013-5-31 16:06

回复 zh116z 的帖子
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是的，养了14天了，首次全量换，之后每3到4天换，细胞很多聚集成团的，不均匀，这是长得好的一片

作者: yeahjl 时间: 2013-5-31 16:08

回复 deshenglll 的帖子# D2 v; N: I' N7 N# {5 m: b A$ O Z
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现在已经传到第2代了，细胞是小一些，但还是相对大，很多杂细胞，一般第二代几天可以传代呢，我的长了一周了还不见怎么长，求助，谢谢

作者: yeahjl 时间: 2013-5-31 16:17

回复 yiyeqiu 的帖子0 T$ M; ^; s- }- O2 F" I
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是吗？求解释，14天原瓶传代的，因为有几片细胞聚集很明显，但是整瓶细胞又不多，现在传代后一周了，长得很慢

作者: yeahjl 时间: 2013-5-31 16:20

回复 cantonchn 的帖子) t, d5 o% z% B; ^
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谢谢，但是怎么可以养的好看一些呢，是不是3-4天换液太频繁呀？细胞不怎么长

作者: Tim 时间: 2013-5-31 16:39

回复 yeahjl 的帖子" ^- P8 B8 s& P, j* o: L$ E
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形态有些差！你这是几代的呢？？密度有点低？建议直接换小瓶养吧！

作者: jack1381818 时间: 2013-5-31 17:04

個人覺得可能因繼代時團塊未均勻打散'所以易產生大小不一現象'所以有的過於老化凋亡漂浮狀況: Y6 ?1 i% R2 x1 B

作者: yeahjl 时间: 2013-5-31 18:32

回复 Tim 的帖子4 P8 {! \6 i; x: s, U( ?

第一代，

作者: mania7041 时间: 2013-6-3 08:26

脐带间充质干细胞本来就程不规则三角形或梭形，也比较大，一般养到12天左右就要传代了，你的细胞貌似还很少，看看是不是培养基的生长因子不足了，你用的是什么培养基：PBS+DMEM还是无血清的培养基很重要，前者的细胞较大些，后者会小

作者: deshenglll 时间: 2013-6-3 10:08

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H& z4 r2 a+ I9 P7 l
14天了才这么少啊，我们做生产的一般12天可以冻存了。你说杂细胞多是你的分离方法的问题。我们一般传代后2天左右就可以再传代了。你先看你的细胞数是多少吧，以数量说话。

作者: yiyeqiu 时间: 2013-6-3 16:28

回复 yeahjl 的帖子7 t4 G# Q) V( Z3 D" V

十四天才长成这个密度啊？长得很慢哦，我养过原代脐带血间充知干细胞复苏后1-4代按照1：4传都是三天这个样子就能传代了，而且细胞长得均匀整齐，但是到了六七代之后，长势就会变慢了，细胞形态也开始变得大小长短不一，还会成团扎堆生长，不懂是不是要分化了

作者: yeahjl 时间: 2013-6-3 17:29

回复 mania7041 的帖子9 }& [. {2 d" N: r% O1 S: e: y1 D
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用的低糖DMEM，10%血清的，你们加什么细胞因子了呀？

作者: yeahjl 时间: 2013-6-3 17:31

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你们的培养基成分是什么呀，加因子了吗？还是？

作者: zsc78 时间: 2013-6-3 21:43

原代是这样不太好，这一片的细胞有些分化，估计不能传几代。

作者: yeahjl 时间: 2013-6-4 10:30

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O(∩_∩)O谢谢

作者: 孙帅帅 时间: 2013-6-4 10:50

个人感觉细胞状态不是很好，曾经我们也遇到过状态不好的脐带原代，也是十四天才长出几团细胞，消化传代后，p1细胞形态有点大，老化的很厉害，直接不养了~~

作者: 孙帅帅 时间: 2013-6-4 10:51

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当细胞有80-90%融合时候赶紧传代，避免细胞接触抑制，产生毒素，使细胞凋亡或老化。

作者: deshenglll 时间: 2013-6-4 13:47

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加了。FGF

作者: ruofan1982 时间: 2013-6-5 11:04

细胞看上去有点老了，形态不是很好看。原因可能是分离细胞接种的密度比较低，细胞生长慢，养了14天就老了。建议下次密度要提高。

作者: yeahjl 时间: 2013-6-5 11:08

回复 ruofan1982 的帖子 J% {6 s5 y' o; w

用的组织块法，那么就提高组织块的密度吗？

作者: yeahjl 时间: 2013-6-5 11:08

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用的组织块法，那么就提高组织块的密度吗？

作者: ruofan1982 时间: 2013-6-5 11:22

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对，提高密度试试

作者: mania7041 时间: 2013-6-5 11:30

如果是用DMEM+10%血清的话，可能还要加入部分的因子2（L谷氨酰胺，提供能量的）和因子1，这样培养出来的细胞一般的状态和标志都是很好的

作者: CELL007 时间: 2013-6-5 16:19

培养基要加谷氨酰胺和HEPES吧，还要加些细胞因子的，如bFGF

作者: yeahjl 时间: 2013-6-7 18:01

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好的，刚好我的因子到了，准备尝试一下，O(∩_∩)O谢谢

作者: yeahjl 时间: 2013-6-7 18:01

回复 CELL007 的帖子# J+ \- J% R$ o7 l- Y

好的，刚好我的因子到了，准备尝试一下，O(∩_∩)O谢谢

作者: tonyww723 时间: 2013-7-12 01:31

楼主分离组织的时候是怎么分的啊？如果直接是用酶消化的脐带内壁，分离出来的大部分可能都是HUVECs，内皮祖细胞。不过看着照片，应该还好，得注意原代细胞的接种密度，建议用孔板养原代细胞。要想得到纯度比较高的原代细胞，建议还是挑单克隆，然后进行96空板进行培养，数量上来后，进行表型和体外分化分析，这样虽然费事，但是毕竟结果自己心里有数

作者: deshenglll 时间: 2013-7-12 10:52

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细胞形态还好啊

作者: 孙帅帅 时间: 2013-7-12 11:28

感觉细胞有点长，折光度还比较不错，但是培养基里面漂浮着好多死细胞！个人认为细胞状态不是很好！请问你是怎么处理的原代？处理原代7~8后换液！~~

作者: xingyuncao 时间: 2013-7-12 17:14

细胞形态不好，可能是因为密度太低，可以消化下来接种到面积小点的培养瓶或者孔板里试试

作者: get0715 时间: 2013-7-12 17:19

原代细胞形态不均一是正常的，每次传代后就是纯化的过程。传代后增殖较慢，其中比较重要的原因是接种密度低，如果能控制在72小时左右就传代是最好的了。

作者: piano尤尤 时间: 2013-7-18 15:22

我觉得有点老态了而且原代传代最好不要超过十四天

作者: daiying5200000 时间: 2013-7-18 16:04

有时候细胞密度不够细胞长的慢，你用的培养基是进口的么？

作者: yeahjl 时间: 2013-7-18 20:52

回复 daiying5200000 的帖子. _/ Z4 ]8 }9 i9 ~

我现在也觉得我的细胞培养基不行了，不是进口的，是Hyclone的，50元一瓶的那种，请问你的觉得哪种培养基比较好用呢？O(∩_∩)O谢谢

作者: daiying5200000 时间: 2013-7-19 08:29

普通的我们用的life的gibco，干细胞培养我们用的stemcell公司的，血清都是用进口的，无血清培养用的KSR

作者: yeahjl 时间: 2013-7-19 11:04

回复 daiying5200000 的帖子5 a8 P" P. d8 x

好的，我觉得你们都用的好好呀，我们都是三思而后行~~~

作者: daiying5200000 时间: 2013-7-19 11:27

做细胞实验就得烧钱，好结果才能出好文章，才能得到基金继续研究啊，呵呵

作者: 18943340581 时间: 2013-7-26 21:38

回复 yeahjl 的帖子5 k: _- g, L' t0 [
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传代的密度要在8000-10000，一般3天融合度就能达到80%了，按照这个密度传代细胞的状态会很好

作者: pdongjian 时间: 2013-8-5 16:10

作者: 沙漠狐o0 时间: 2013-8-6 13:33

换更好的培养基吧。。。: W4 Q4 ]; P+ T
一般第5天、第8天的时候换液，然后过2~3天就可以传代了。。。9 Q, V9 a( D+ @8 U
组织块接种：0.5g/T75培养瓶。。。

作者: deshenglll 时间: 2013-8-6 14:27

回复 yeahjl 的帖子0 l/ x: z0 y6 V K; [% u; F6 G$ y: e
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挺好的。细胞刚出来的就时候就是这样的。

作者: avbn 时间: 2013-8-12 15:30

回复 yeahjl 的帖子
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细胞状态不是很好，建议多做几批试试，适当提高接种密度

作者: wangbo19880315 时间: 2013-8-27 10:15

细胞接种密度过小，原代培养时间过长，这种细胞不算乱，铺满形态就会好的！

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