干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 胎盘干细胞酶消化问题 [打印本页]

作者: chenzhengliang 时间: 2013-6-3 10:08 标题: 胎盘干细胞酶消化问题

论坛里看了好多帖子，对于酶消化法培养胎盘干细胞有好多做法，有的是单用胰酶，有的是胶原酶（胶原酶中还有几个类型），有的是两个连着用。不知道到底哪一种酶消化胎盘分离的干细胞更多更好点，求各位前辈分享心得。

作者: zhangjieyctc 时间: 2013-6-3 10:58

我们都用胶原酶Ⅱ型的，浓度1%，效果不错

作者: yangweirenhao 时间: 2013-6-3 16:38

胶原酶1，2，4都可以，二最好一稍差四最差

作者: ganggangtry100 时间: 2013-6-4 15:38

用胶原酶吧，组织块不要太大，37度，根据组织块的消化情况，适当延长消化时间，消化结束后，可洗涤或高速离心，均能得到不少细胞的。

作者: chenzhengliang 时间: 2013-6-4 16:24

回复 ganggangtry100 的帖子
% `4 P: h" k& v( z
消化结束不需要用100目不锈钢网过滤吗，直接离心就行吗？

作者: ganggangtry100 时间: 2013-6-4 16:32

可以过滤的。不过，把握消化时间，几乎可以收到单个细胞的，培养中的很小组织块是不影响结果的，而且，有时小的组织块也会有细胞爬出的，说不定是个意外收获。

作者: chenzhengliang 时间: 2013-6-4 18:56

回复 ganggangtry100 的帖子

谢谢分享，下次试试。

作者: CELL007 时间: 2013-6-5 16:27

消化后要过滤的，毕竟在剪的过程中会有一些稍微大的组织块；然后再离心收集细胞，重铺就OKl了。

作者: chenzhengliang 时间: 2013-6-6 14:42

回复 CELL007 的帖子2 x b% B5 I+ E3 |' j! Y, X# X6 ]( ^

那我想问一下，要是消化后有很多较大的组织块，过滤时未滤过的部分应该也有不少细胞，要不要把滤渣重滤下，要的话，用什么滤？谢谢！

作者: CELL007 时间: 2013-6-6 15:21

第一，用剪刀剪的时候要尽量碎；第二，过滤可以用100微米的筛网（BD)就可以。

作者: chenzhengliang 时间: 2013-6-6 16:10

回复 CELL007 的帖子
: U6 U- J3 c m, n* Q, z3 f4 L5 `/ t
请问你们做的是那一部分，我们做的是小叶，小叶间毛细血管、隔膜等组织比较多，剪的很细心很努力，碎是比较碎，但结缔组织比较多，消化不动啊。所以我们过滤时比较烦，杂的太多，不知道有没必要多洗脱几次？

作者: CELL007 时间: 2013-6-7 08:00

实在消化不动的，就不要了吧。

作者: nydfy 时间: 2013-6-7 08:22

用ROCHE的collagenase A效果最好，之后分别用BD 70um和40um的细胞筛过滤，洗后就OK了！

作者: chenzhengliang 时间: 2013-6-7 08:55

回复 nydfy 的帖子' G& M( M* n, K$ |. A% z( @/ R8 ?
2 s; M, d* a* r. ^2 c6 r6 A' a w
谢谢！ROCHE的collagenase A还没怎么听说过，我查了下，好像价格比collagenase Ⅱ贵不少呢，效果也比它好很多吗？还是一些特殊实验需要？求解。

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)