请教一下各位:, p9 n# Y7 O$ K
1、如果用悬滴法形成EB的话,是使用纯的ES/iPS来进行的么?细胞量大概在多少呢?那MEF是如何消除干净的呢? ( r+ O2 f/ o: d y2、如果直接用悬浮法的话,就是把细胞消化下来直接接种到低附皿里就可以了么?是单细胞悬液么?MEF不需要清除么? 3 t% I, ~; d' A- j3、还有在细胞克隆形成的时候,如果需要把克隆挑取出来,各位是用的什么设备呢?普通的体式显微镜能够看到么?还是需要什么特殊的配件才可以? ( q8 @; C) n ]; h Z谢谢各位!作者: canyon 时间: 2013-6-19 10:43
回复 cn8867567 的帖子 1 v; I; ~9 Y' V. q+ k + B5 x5 K7 h. G D, S B想再请教一下,EB形成之后重新贴壁进行诱导培养的这个过程中有什么技巧么?我总是不能让EB很好的贴壁,要么是看着已经贴了,加液之后又重新悬浮起来;要么是放的时间长了,细胞都死了(本身带GFP的细胞,淬灭了),我用的孔板,事先用0.1%明胶铺了有几个小时。这个怎么解决呢?还想问下,如果做WB或者PCR的话,6孔板一个孔里面要有多少EB存活才好呢?谢谢!作者: canyon 时间: 2013-8-11 01:39
1- 贴壁第一天可以使用20%FBS,半量培养基,贴牢后再补加;2 m- z& Q6 X: d. Z& v5 T6 @/ A4 r
2- EB球的数目,尽量多些吧,目测应该在100个以上才安全些。作者: echoxy1020 时间: 2016-8-9 04:38