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脐血干细胞复苏现象请教
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作者:
anzhida0823
时间:
2013-6-6 17:45
标题:
脐血干细胞复苏现象请教
脐血干细胞复苏时，融化时时一块一块像浮冰一样好呢 还是整个一块缓慢融化好呢 请各位大侠不吝赐教，谢谢！
作者:
jack1381818
时间:
2013-6-7 14:47
1.首先需適用合容器儲存;袋式'管式
" d8 H: y6 Q% D
2.解凍時應浸入液面下避免上下溫度不均
4 @+ H! T L) w$ h. [
3.融化时时一块一块或还是整个一块缓慢融化與細胞濃稀度及均勻性有關'j
9 v+ a n3 t' R
所以依據實驗去解凍只會有快慢差異影響活性'無法依好壞為判定依據' 以上說明
" r1 t$ ?# U' ~
作者:
呼吸
时间:
2013-6-8 08:48
细胞复苏，要迅速，时间越短越好。掌握慢冻速溶。
作者:
anzhida0823
时间:
2013-6-9 07:14
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jack1381818
的帖子
4 M+ Z( G; }& X6 [7 g) r! ~6 i
; w) N, A* y& l: z3 ]2 ]& D1 g
我们用的是50mL冻存袋，跟脐血库用的一样，解冻时我就发现自己动存的细胞融化的慢很多，一般需要3-4分钟，而脐血库的只需要2分钟就化开了，细胞数量在14-16*108左右，自己冻存的复苏后或率也比较低，有什么办法能提高均匀性呢？浓稀度在多大比较好呢？请指教，我没什么太多经验，谢谢！
作者:
anzhida0823
时间:
2013-6-9 07:17
还有就是复苏时是带着铁盒子一块置于水浴中比较好还是去掉铁盒子比较好呢？我们现在是将铁盒子置于自封袋中一块儿置于水中，待铁盒子温度稍高点再去掉铁盒子不知道这样好不好？
作者:
jack1381818
时间:
2013-6-10 01:32
复苏时去掉铁盒子比较好
作者:
deshenglll
时间:
2013-6-11 11:00
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anzhida0823
的帖子
9 m0 Z- ]3 t7 w8 w. M- z
+ _5 R! Y# r# o4 h3 G
你们复苏的脐带血是什么样子的？我们做的脐带血复苏后没有明显的分成，离心也离不出单个核细胞。求解。
作者:
大少爷
时间:
2013-6-11 12:48
复苏时，去掉铁盒子，将冻存袋外面用酒精擦拭后装入一个干净的塑料袋，置于40度水浴锅中，并不断轻轻摇晃塑料袋，加快细胞复苏。
作者:
jack1381818
时间:
2013-6-11 17:42
脐带血复苏后没有明显的分成，离心也离不出单个核细胞。
; A9 E. @% V1 h9 p$ g% Z
建議: 1.解凍後的細胞懸浮液加入PBS以稀釋DMSO的毒性。再離心
& ?5 n3 Q8 R9 C: v8 n
2.量太少而不足以稀釋DMSO的毒性及離心時分層。
- j: J1 n% U0 b V3 Q
作者:
细胞海洋
时间:
2013-6-13 09:19
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jack1381818
的帖子
5 k1 @* e5 W0 {' Q3 r* U
8 A) c9 C% v' z+ u8 {) a8 F: O ]: v
你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
# D1 Z1 m* J* c% q" K7 m
0 q6 ]; h$ a% B0 A- J2 M4 {
否则他会看不到
作者:
细胞海洋
时间:
2013-6-13 09:19
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deshenglll
的帖子
0 @' i0 q. p+ Y E2 e
% _6 h& U: f) X `3 O8 ]) K C
看9楼
作者:
jack1381818
时间:
2013-6-13 10:38
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细胞海洋
的帖子
: z6 r) F3 c+ t7 X2 ?
% `5 Y; j2 v7 N3 V$ t1 r, W
收到'感謝
; [/ m1 v1 L, F% S4 y8 y; }; A7 c: j
作者:
anzhida0823
时间:
2013-6-13 13:23
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deshenglll
的帖子
8 ]9 g$ Q# u, q0 |
! J( n9 H& C5 k0 v7 M, j
我们复苏的脐带血是30mL/袋的，颜色暗红色，融化到袋内冰绝大多数融化尚有少量残余状态即停止复苏开始分离，复苏后细胞死亡速度很快，应尽快分离，血量也是重要因素太少了就分不出来。
作者:
deshenglll
时间:
2013-6-17 10:55
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anzhida0823
的帖子
+ B+ `+ V) \7 H J! e, p! M2 m
4 [8 t9 _* t2 h6 w, B. K t I
我能问问用什么方法分离么？我们做过用离心机都没离下来。
作者:
deshenglll
时间:
2013-6-17 10:56
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jack1381818
的帖子
7 o, K. i; W m) E$ e* }8 {
. T: }( x' q F3 |; h3 g3 y
我们离心了，没见到有单个核细胞啊。
作者:
jack1381818
时间:
2013-6-17 14:13
建議加入CD34、CD45、7-AAD、标本一起加的孵育10min后立即上流式机检测，结果测出的细胞活性
$ g p" C$ H8 x1 i Q* z
裸眼看不準
作者:
jack1381818
时间:
2013-6-17 14:14
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deshenglll
的帖子
+ |4 i+ g( G7 Y( a; u/ s
, B9 a9 c- l" R1 u. k3 }! S% A g
建議加入CD34、CD45、7-AAD、标本一起加的孵育10min后立即上流式机检测，结果测出的细胞活性
9 m+ i( x# ~; k% }# I
裸眼看不準
作者:
jack1381818
时间:
2013-6-17 14:14
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deshenglll
的帖子
4 K! m G; G* G* M- F6 k. ~% I
3 G) F* {4 t' _2 I) @5 h M
建議加入CD34、CD45、7-AAD、标本一起加的孵育10min后立即上流式机检测，结果测出的细胞活性裸眼看不準
作者:
anzhida0823
时间:
2013-6-17 16:51
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deshenglll
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& T. C7 g7 p3 p9 g Y- r6 d# Z
# c* c( i* w" P) B! D: d
不好意思，因为个人工作性质原因，我没有亲自分离过，但是据我所知脐血体积小于60ml就基本上什么都分离不出来了。
作者:
deshenglll
时间:
2013-6-18 10:16
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anzhida0823
的帖子
; n u6 y- f5 [: B. J' V1 d
) H$ n+ X4 f8 H# e& E& v
那你们那有没有谁做过的，求详解。我们这复苏后血都是浑浊状，离心离不到单个核细胞。
作者:
jack1381818
时间:
2013-6-18 14:05
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deshenglll
的帖子
! d5 B6 J9 N7 ^5 N+ n6 A
' ?: c/ Y/ a& o: I. j, n$ s9 L2 u+ i9 V
建議
6 \* ?9 Z: m5 h. k. ?! J
1.你可改用15ML小管以300G離心5-10分' 理論會比50ML管好
4 Z" q4 x4 F7 D
2.紅血球lysis的處理；若細胞或組織有脂肪團塊的干擾，建議多用幾次40 μm filter進行過濾以排除干擾。
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3.改用使用磁珠系統的原理就是搭配不同的單株抗體或多株抗體標定於磁珠上，再用此磁珠來挑出目標細胞
作者:
deshenglll
时间:
2013-6-20 11:05
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jack1381818
的帖子
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! |9 Z4 h6 B, r" V: X
谢谢
作者:
细胞分裂
时间:
2013-6-26 08:47
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anzhida0823
的帖子
$ ]- F- X$ t! Y, L0 D+ w! I- O( r
$ E3 G' ?# E$ d) q/ G0 \
当然是去掉铁盒子比较好了，然后用薄膜手套装住脐血袋，放在水浴锅里解冻
作者:
三月桂花香
时间:
2013-7-15 14:57
复苏去掉铁盒子吧，然后表面用酒精擦拭下下，放入37度水浴锅迅速复苏。
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