干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站
标题:
请教CIK培养过程中出现的絮状物问题！！！
[打印本页]
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-13 22:51
标题:
请教CIK培养过程中出现的絮状物问题！！！
我们是采用血液分离机分离外周血单个核细胞，然后加入培养袋中诱导培养CIK，这种方式采集的单个核细胞量较大。
) w, R0 h: u6 o5 m9 X
我们在培养过程中发现，贴壁后的悬浮细胞转入培养袋中后第二日，或者加入培养袋后两三天后，在培养袋中会出现很多絮状物，我想问的是大家有没有遇到过这种情况呢？大家也帮忙分析一下原因吧，附图片见下。[attach]52677[/attach]
作者:
easternliu
时间:
2013-6-14 08:50
遇到过好几次了，无解哇
作者:
sunny.yc
时间:
2013-6-14 09:42
回复
lyj-0017
的帖子
1 d& _9 s% X- ^7 B, X" z# N
0 t8 D6 z% T$ D1 u
你的照片是怎么拍的？怎么看不出是培养液呢
作者:
孙帅帅
时间:
2013-6-14 10:14
没有遇到过 ，是不是染菌了？我们都是用一步法分离细胞，细胞是克隆状，不过你的图片看起来很不清楚！！
作者:
呼吸
时间:
2013-6-14 10:46
没遇到过，首先要确定单采分离出的是否是单个核细胞，是否含有很多杂细胞，建议转袋的时候过一下筛网。
作者:
lizzy_81
时间:
2013-6-14 11:31
有时候，细胞接种时没吹打均匀，很多细胞聚集在一起生长，也会这样。
作者:
chenguangyu
时间:
2013-6-14 13:03
见过这种情况，像是成固体状的感觉，细胞长的很慢，也是不知道为什么。絮状的话是正常的，絮状的增殖到一定程度自己就散开了。
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-14 13:34
回复
easternliu
的帖子
7 \# G& m( C3 x! n, ?% N6 x$ m8 V# n
3 C" B% z8 {, r. w
你们是直接采集外周血还是使用血液分离机呢？
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-14 13:35
回复
sunny.yc
的帖子
9 O6 Z7 K* q1 C, T) Q
% ~* Q$ r: {$ |# c6 ?/ n
不好意思啊，照片拍的时候有点反光，像素也有点低
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-14 13:39
回复
孙帅帅
的帖子
; ]* U0 A4 \. i
8 z: ~; H* @% N9 m/ q
请问你们是直接采集外周血分离MNC还是机采？
! I( A$ h! K, H4 G, S; I$ P; g2 {
肯定不是细菌感染，染菌我还是能看出来的。
, H0 S1 U# v2 \' a9 X
我们是有的细胞是克隆状，但有的就确实会出现絮状物，并且，同一个人的两个培养袋，一个出现絮状物，一个却是长得不错，不知道到底哪里出问题了
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-14 13:42
回复
呼吸
的帖子
) W/ H. t1 @" X3 Z9 l" J6 e
}5 q- u6 a9 |4 Y6 o
使用分离机分离时，采集人员肯定都是按照采集MNC的设定流程操作，这个应该不会错吧。
. R$ e) I# c# ~. }
您指的杂细胞是指什么细胞呢，转袋过滤是要过滤掉什么成分呢？
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-14 13:52
回复
chenguangyu
的帖子
: j- H5 {' n F8 B# @3 k' @( E
4 c& N' o: M/ s% k6 _
请问你们是用分离机采集MNC吗？
0 o; O \# C9 T P$ ?: A
我感觉细胞转袋之后第二天看时，培养袋底部有一层膜状物质，用手轻按就会浮起来变成絮状，在显微镜下观察这些絮状物发现，絮状物都是细胞粘连在一起，这样对细胞后续培养会有什么影响呢？
- G6 @1 n u1 T' F/ _3 l
到底为什么这些细胞会粘连在一起呢？还是因为细胞密度太大？抑或是转袋之前没有清洗干净血浆成分？
' n$ _9 B6 E; b2 ?' r1 A, m# W
作者:
sheepthief
时间:
2013-6-14 13:53
是单独的这个病人还是所有的病人都是这样的？
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-14 13:53
回复
lizzy_81
的帖子
" L$ ]9 E0 i( l) ^1 Z6 [5 q8 B
& j! A; U w1 Z: I" G9 a6 R0 B
嗯，也许有这个原因，以后制备时注意一下
作者:
孙帅帅
时间:
2013-6-14 13:55
回复
lyj-0017
的帖子
- s7 G1 N5 f) `$ ^/ F% x
0 U5 n) n+ c4 y9 ]
直接采集~~ “同一个人的两个培养袋，一个出现絮状物，一个却是长得不错” 这个就比较奇怪了。你们是用一步法分离外周血mnc吗？
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-14 13:55
回复
sheepthief
的帖子
4 r7 a( ]+ w7 e8 g" s
( P0 t) h* E+ G4 ~- _) F* H
是有的病人这样，有的不这样，并且，有的病人刚开始时还没有，但是培养几天之后才变成这样，您给帮忙分析一下
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-14 13:59
回复
孙帅帅
的帖子
$ S V3 `6 U Q+ f5 j4 Z
2 j* D& Q# `) h3 M, S$ M3 ^1 l
是啊，我也很奇怪为什么会这样。
4 ]# W/ ?$ m8 E8 G& S8 z
我们是使用分离机采集MNC，而不是直接采血，你们是采集50-100ml外周血进行分离吧？
7 P) ]5 Z! h C
什么是一步法分离外周血MNC？
作者:
daifenghao
时间:
2013-6-14 16:16
有没有添加血浆？若是有，血浆最多只能加1.5%含量
作者:
daifenghao
时间:
2013-6-14 16:24
又一次我添加了3%血浆，第二天观察出现跟楼主一样的情形，判断可能是由于血浆浓度加高了
作者:
孙帅帅
时间:
2013-6-14 16:56
回复
lyj-0017
的帖子
" w3 s2 N; s% q
9 S8 ?+ D# N7 J
就是用Ficoll分离外周血MNC，这样分离的比较纯~~ 我们都是用一步法分离的，你去网上找找 很简单的！
作者:
硕果累累_555
时间:
2013-6-14 17:31
细胞图片不清晰，有可能是转袋没有拍散细胞聚集生长，但看着不像，还有一种可能是培养细胞所用器皿或者瓶袋的质量不好，有微量残留造成的。
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-14 17:35
回复
daifenghao
的帖子
$ {- g8 P) N; w3 y, Y
" z% T" E0 T( L; X! ^
没有添加血浆，我们不用血液离心完后的血浆的
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-14 17:37
回复
daifenghao
的帖子
' t8 F- ]1 C' E* F/ Q
$ a, n, X# E' V
会不会是我们分离白膜层之后，清洗细胞不够，导致残留的血浆也一同加入培养袋中了呢？
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-14 17:39
回复
孙帅帅
的帖子
x; p2 q+ x2 j+ p6 M6 u' o
6 z3 r; z* ] }7 }/ `: M( b4 L, z
我知道你说的这种操作，关键是你们是用50-100ml外周血分离MNC，我们是机采分离MNC，机采采集的MNC数量肯定比前者数量要多的多，这两种方式的培养情况肯定不一样的
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-14 17:48
回复
硕果累累_555
的帖子
! b+ d/ I4 G9 P1 P" T' s
2 @: w4 c; Q! o
我们转袋之前都是把细胞吹散的，会不会是细胞密度太大的缘故呢？
+ Z" e7 C" ?4 X/ h+ l5 |7 \' N
另外，我们用的都是康宁的瓶子，TAKARA的袋子，质量应该没问题吧
作者:
sunny.yc
时间:
2013-6-15 11:19
回复
sunny.yc
的帖子
$ [) t U7 n5 a% u9 [& @1 A3 V4 m
( K+ Y2 g1 g. N+ M
我们之前也遇到过这个情况，当时是在包被过的培养瓶中，聚团非常大，而且瓶中的散落的细胞几乎没多少了，细胞碎片也比较多，吹打开也没用，过段时间还会重新聚集。
& m4 {4 V2 P% p3 h! j2 d+ U
这种情况也咨询过别人，得到的一种答案我觉得还比较靠谱，就是，细胞形成集落了，但我感觉还是细胞受刺激过度。
- |4 S+ U* a* I7 E% ]
是不是你的细胞因子浓度太高导致的呢？
作者:
1179240331
时间:
2013-6-15 14:51
本帖最后由 1179240331 于 2013-6-15 14:55 编辑
2 d% R9 K* `1 R+ c" e
! r! H7 g) g, [3 i i
回复
lyj-0017
的帖子
" w# H# N! i7 X
( }* O. b8 `$ M: i& v
静脉采外周血培养也出现过这种情况，红细胞稍多些，粘连在培养瓶底，吹不散，团块状，像破网，很想知道原因
作者:
1179240331
时间:
2013-6-15 14:55
回复
daifenghao
的帖子
/ Q; A, _" R* H' j, E/ i7 U( _+ X6 J- o
' [ N% K/ e' M
请问自体血浆吗？是否灭活呢？试过加8%未灭火自体血浆，会成团块
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-15 15:32
回复
1179240331
的帖子
7 |# u# X/ X; t
! [0 Y k9 f5 L) F" w& s, S
跟你说的现象一样，MNC贴壁之前都是吹散的，放入培养箱贴壁之后，培养上清中就会出现团块状物质，就是网状粘连，培养袋中底部铺成一层膜。难道就是红细胞过多的原因？或者是分离MNC后，清洗过程还有残留的少量血浆？
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-15 15:33
回复
1179240331
的帖子
3 `( E5 L, R6 \9 c- @ i
) I4 n: e) H) T; L
那你们后来如何处理的呢？处理之后情况有所改善吗？
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-15 15:40
回复
sunny.yc
的帖子
) D3 J6 t+ M5 N! A! v/ M
# V* y4 s" v* G+ ]
那你们后来是采取了什么操作避免了细胞聚团了呢？
0 L4 m! D) p) z* N3 w* z
按理来说，如果细胞是形成了集落，这应该是好事吧？CIK生长过程中不就是应该以集落形式增值吗？
/ R0 w E, `3 p7 x; @1 q
另外，你说的刺激过度是什么意思呢？一般都是按照常用的因子浓度添加啊
作者:
chenguangyu
时间:
2013-6-15 16:18
回复
lyj-0017
的帖子
" y, V5 j* g0 ] g7 T
) c( b0 X: p; w: B1 C* C: l: k
我们不是机采的，人采外周血50ml，刚开始一周用培养瓶培养，细胞量多了转移到培养袋中。刚开始第3d会出现絮状且细胞体积会比较大，注意及时添加液体。出现絮状说明细胞长势比较好，继续培养絮状会逐渐分散开。
作者:
daifenghao
时间:
2013-6-15 16:38
回复
chenguangyu
的帖子
u8 J1 C! n% b( @* A4 D
) C- U. N% p4 X9 w) X# N
我们出现的情形是在培养袋里成白色丝膜状的铺开在袋子里，摇培养袋，这些白色丝膜样就会聚集成团块，大的甚至达到几厘米团块。这些继续培养会自动散开吗？
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-15 16:51
回复
chenguangyu
的帖子
T! y' `1 j/ t0 e7 c, d {
4 H% L' a( F0 K, S6 b4 ?6 S- u
原来如此，那我们也再继续观察一下看看吧，非常感谢！但是，为什么会出现絮状物呢？有什么好的办法可以避免吗？
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-15 16:51
回复
daifenghao
的帖子
# w1 T2 _3 _& g" z
, p$ r s# ?% O2 Q
同问！你们出现这种现象的情况多吗？
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-15 22:12
回复
人医
的帖子
* D& B* ^* A" {9 X" i7 k- Z' S
* H( ?7 R: _" O
有这么先进吗？可否详述一下呢？或者有什么可参考的文献材料吗？多谢了
作者:
人医
时间:
2013-6-15 22:25
传统的方法一般要不得10~15天，随着培养时间增加细胞活性下降，治疗效果不佳。CIK双阳性低
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-15 22:33
回复
人医
的帖子
" |+ {. f& J" t. W% K0 `' |" I
* b7 N; g% F8 T: S% A7 W
兄弟，能不能别卖关子了嘛，给大概介绍一下也行啊。
# y; M4 f0 t6 y5 k
比如采集多少外周血？7天的时间能够扩增出来多少细胞呢？
作者:
人医
时间:
2013-6-15 22:35
转到培养瓶看一下，1纤维旦白，2提取过程中细胞损伤，3细胞量太多，一般吹打之后就会消失，
作者:
人医
时间:
2013-6-15 22:46
我级别不够
作者:
lousia04306
时间:
2013-6-16 06:49
培养袋中的细胞需要进行过滤，里面有细胞聚集的现象
作者:
spring1221
时间:
2013-6-16 08:42
回复
lyj-0017
的帖子
[5 d3 p3 ^; }; n* Y H% o
. j9 N( d Y/ X F) w
楼主，你好。你们出现的情况我也遇到过，我认为是细胞量过大的问题，我们采取的处理方法是添加一定量的白蛋白，还有就是cik的培养过程中特别是要加液时要注意进行摇晃或者吹打。另外需要注意的是培养的cik在采集过程中要进行过滤，希望能解决你的问题。
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-16 12:50
回复
spring1221
的帖子
* ]7 o( H5 H; y1 k" L
) z: G+ J1 }# t# _, o5 C
非常感谢，经验之谈！
% y4 M1 p# |2 Y1 g+ @$ n
我也觉得是细胞量过大的问题，白蛋白是加到哪里呢？清洗的PBS还是培养液中？其余的措施都按照你说的注意一下，再观察一下吧。
6 l, l8 ?1 }- ?6 ?; b
那么你们以后的培养过程中也还有这种情况出现吗？
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-16 12:51
回复
lousia04306
的帖子
, V# q" x- z8 N4 p0 M. P& h
6 i$ G# I7 Z( ?' L6 A
我就是想知道细胞聚集的原因啊？可否有合理的解释呢？
作者:
spring1221
时间:
2013-6-16 15:18
回复
lyj-0017
的帖子
6 L$ }; D @4 {6 H: N
2 x1 j8 D% A# L3 J
白蛋白是直接添加到培养液中的。我只遇到过2次，挺小概率的，感觉还是要注意，在加液过程中的摇晃吹打。最近没有出现。
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-16 15:34
回复
spring1221
的帖子
$ m% f8 _! v# Z- m
4 @. m; f0 G3 \& E
你们是直接采集外周血分离MNC还是机采MNC呢？培养都是用培养瓶而不用培养袋吗？
作者:
sunny.yc
时间:
2013-6-16 22:45
回复
lyj-0017
的帖子
* J$ ?' M4 |8 e: Z9 W+ l3 F$ \
" _) k7 X# |9 h2 G3 h
不好说，我感觉你们的细胞因子添加量普遍略高，比如这么给您举个例子，同样是一样浓度的细胞因子添加量，平行试验，不同的样品来源，耐受程度是不一样的，有的样品聚团就很厉害，有的样品聚团就要少很多，对于CIK培养我做过不少，我建议你们可以尝试一下减少细胞因子的添加量，最起码试一下也好吧，呵呵
作者:
xu_shufen
时间:
2013-6-17 07:40
此种情况有时会遇到，可能是纤维蛋白质类物质。是否与分离的单核细胞中，血小板的多少有关。
作者:
daifenghao
时间:
2013-6-17 11:04
回复
lyj-0017
的帖子
9 F+ Z% _8 L" R( n. D8 K5 ^% M' X
# P* P& ?4 H# P/ \! T) C
我们是血浆含量加3%就出现了这个情况
作者:
1179240331
时间:
2013-6-17 16:01
回复
lyj-0017
的帖子
* i8 e: `# @7 Z9 S, ]
4 U# G) [- V+ N5 E H1 {
一般到最后，已经洗过了3次，估计血浆物质剩下的不多了。听其他人做的，采血混合不均有凝血的时候，也出现过细胞团块
作者:
1179240331
时间:
2013-6-17 16:02
回复
daifenghao
的帖子
$ q9 Z$ r2 O; Z& O- M3 _
5 @6 g! M$ n8 z
同问同问
作者:
sunny.yc
时间:
2013-6-18 09:49
回复
daifenghao
的帖子
8 q6 u2 D h$ B8 k2 O( S$ U' W
7 Y& t( X# g3 B! Q
你们的血浆经过灭活处理了吗
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-19 08:20
回复
sunny.yc
的帖子
$ ~+ b7 X7 H8 i$ R3 {8 W6 \9 t
& w9 _9 j* {* ]0 o6 J1 A2 [
实际上，在贴壁过程中就已经出现絮状物了，此时是没有添加细胞因子的。但是，有的细胞确实是在培养后出现絮状物的，可能还是不同人对相同细胞因子的耐受程度不一样吧，还需要多积累经验啊，多谢~
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-19 08:23
回复
xu_shufen
的帖子
$ m" i: _- N" }/ G' A9 F+ E
7 v1 Q$ q8 N6 }& d! Q5 ~7 t T$ P
嗯，我也认为是纤维蛋白类物质引起的，也可能是细胞量过大的原因，血小板的可能不大，因为分离MNC时都是先把白膜层上方大部分液体先吸掉的，血小板剩余量应该不多
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-19 08:25
回复
daifenghao
的帖子
; |! d3 d' Q. o/ u9 j. {
& q4 n; q7 G. M
添加进去的应该用血清吧？血浆里面本身就含有大量纤维蛋白，加入血浆后出现絮状物应该在情理之中才对
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-19 08:31
回复
1179240331
的帖子
, T, K1 l4 Q9 ?2 v$ G
, E& D% _; U3 G# Z6 g( ]9 ~
我们现在也在注意血浆物质残留的问题了，分离MNC时也已经严格清洗了，观察一下看看吧。
8 p& n( U' o$ h0 f3 z1 I: l6 \
采血要是混合不均匀的话，凝血也会使得分离的MNC量减少吧。
+ d) i5 R o5 c3 |1 l7 a, ~
你的意思他们分离出MNC后进行培养时出现细胞团块吗？
作者:
sunny.yc
时间:
2013-6-19 09:09
回复
lyj-0017
的帖子
M& o/ S* r4 Q. j6 f' J
0 c2 e; w4 s1 d, N$ ~
如果贴壁的时候有絮状物，是不是血浆的问题，你们用的血浆经过灭活处理过的吗？
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-19 11:10
回复
sunny.yc
的帖子
6 z, |% Q# k! o* _: l
* y1 M9 a8 [% l" f* `7 A" S) M$ e
我们贴壁的时候只加培养基，没有同时添加血浆（加血浆还是血清？）。
: e+ U. ]% d' j* y& E1 a; G% \
如果加点白蛋白会不会好点呢？
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-22 12:33
回复
chenguangyu
的帖子
) u) d- Y/ X* y/ Q
+ p$ a; q7 y3 y" A m/ g" W
最近细胞生长的状态如你所说，袋内白膜确实是逐渐自动散开了，并且细胞长势还不错。但是有时候，加液后，原本长得不错的细胞会聚团，像是细胞死掉了聚团？这是什么原因呢？
作者:
lyj-0017
时间:
2013-6-22 12:35
回复
daifenghao
的帖子
- u$ x5 M/ y8 H% Y6 h! h9 b
* y. C1 U- k1 a k) [8 i/ M/ p
我现在发现，细胞铺袋后不要摇晃袋，让细胞自己调整，过几天白色丝膜就会自动消失，你们可以观察一下试试
作者:
saintwang6521
时间:
2013-11-9 19:42
可以加入部分自体血清试试，单采得到血浆后56摄氏度灭火30min后再2000rpm离心20min取上清得病人自体血清
作者:
saintwang6521
时间:
2013-11-9 19:44
自体血浆一定灭后制得血清后使用，直接加血浆一定会出现胶状现象
作者:
rocfield
时间:
2013-11-19 12:27
回复
lyj-0017
的帖子
3 Q, V$ v4 Y& t, A1 z( I2 ^, ~; }
# ]& _+ K3 r: d/ w! l9 Z
是不是集落长得太大，造成细胞团内局部营养不足，出现一些细胞碎片与集落粘在一起？我养的经常看到肉眼可见的像絮状物，在显微镜下看是细胞碎片和细胞团在一起。
作者:
lyj-0017
时间:
2013-11-19 14:18
回复
rocfield
的帖子
- H4 r, F0 t. F- R1 o
2 t4 g, f( f- U( |' k5 Q7 A Q
请问你是用培养瓶还是用培养袋养的呢？你说的经常会出现是指的基本每个病人的细胞都出或多或少出现絮状物吗？你们现在有什么改善吗？
作者:
rainwu
时间:
2013-11-25 10:48
是不是细胞成团了啊？我们也遇到过几回！
作者:
lyj-0017
时间:
2013-11-26 22:54
回复
rainwu
的帖子
9 P& O8 x' e% J& O; D1 e
$ ~0 K/ s4 o- j {& r- R
你们是什么情况造成细胞成团的呢？后来如何解决的呢？
作者:
大海之家
时间:
2013-11-28 15:19
回复
lyj-0017
的帖子
* F$ X t# H- b; A
4 d2 W: f. ?9 D( z1 G$ k" T
这个不可能，你是不是添加了其他的血清？导致无血清培养基的蛋白含量饱和析出？
作者:
大海之家
时间:
2013-11-28 15:21
回复
sunny.yc
的帖子
* a. w) T) {# t' q0 H
$ g4 `/ _% a) t, q3 l* Q6 t
最后这种克隆团有散开吗？你的cd3包被浓度时多少？
6 ~: B, H5 x* u) q
作者:
sunny.yc
时间:
2013-11-29 08:59
回复
大海之家
的帖子
6 h! E& l+ j* Q& g( Q
8 ]- z& W, k1 K4 d( X
有时会散开，有时可能时间来不及等它散开
/ I* O/ O' e( z7 a6 k |5 Q, R
z [* ?' K8 O, ~
我不用CD3包被
作者:
大海之家
时间:
2013-11-29 14:10
回复
saintwang6521
的帖子
0 Z+ f' J9 O- v6 n
* z# {0 z# y* A0 _' O
这个应该还是血浆吧，另外，这样灭火离心处理，纤维蛋白原就除掉了吗，加到培养基就不会有析出吗？
作者:
rainwu
时间:
2013-11-30 13:44
回复
lyj-0017
的帖子
& j1 U8 ]- P% V2 L5 b7 O
" ^7 k# _4 w8 ^! } y9 \
有几次是细胞破碎的太多，我们放弃了，没有用，有几次我们也不知道什么情况，但是检测之后，什么指标都是正常的，我们换液之后继续培养就没了。
作者:
流泪的鱼
时间:
2013-11-30 19:46
回复
孙帅帅
的帖子
) m+ @& k$ l4 @+ M+ l9 Q
2 [" ?; p" K4 U, ^& s- \& e
怎么一步法，只是沉降吗？不用分离液？
作者:
569981454
时间:
2013-12-30 17:22
絮状物应该不是染菌，你看一看是不是培养基里的杂物。
作者:
龙七
时间:
2014-1-8 16:24
照片不清晰，不好判断
作者:
shamoye
时间:
2014-3-26 11:01
你是不是在里面在里面加了自体血浆，我们一般在里面加自体血浆的时候会有，但是出现之后就解决不了了
作者:
lyj-0017
时间:
2014-3-26 12:53
回复
shamoye
的帖子
9 q7 S X% m8 w
7 O; g+ R( ^3 I$ z+ i5 M8 O6 F
我们是不添加自体血清的。你们如果出现这种情况，细胞还能养得起来吗？最后回输咋办呢？
; x" D5 Y/ e! d4 n* M, t/ \9 b
作者:
shamoye
时间:
2014-3-26 14:02
回复
lyj-0017
的帖子
# `8 o3 H& K q; X
2 S O7 l# t x" N! _
出现的话肯定养不起来了，数量相当少，回输的时候把它吸出来
作者:
lyj-0017
时间:
2014-3-26 15:36
回复
shamoye
的帖子
$ T9 G. X- X$ H) i4 U2 B* v
J8 W2 E& c4 t6 I0 I1 W$ q
也只能这样了。但是为什么添加血清会出现这种情况呢？你们现在有结论吗？
作者:
shamoye
时间:
2014-3-27 15:21
回复
lyj-0017
的帖子
7 e0 V4 `1 y6 W" h9 |5 x/ Y
0 M7 `* E8 L5 q4 N- j! ]
具体成分不清楚，
作者:
真水无香
时间:
2014-4-2 15:49
如果添加的自体血浆里面有絮状物，黏连上死去的细胞，会出现这种情况。
作者:
lyj-0017
时间:
2014-4-3 09:21
回复
shamoye
的帖子
" j) V/ }3 b; k ?* t }; U
) C. u# X9 E3 ]7 ~: W
看来这是个普遍的问题
作者:
lyj-0017
时间:
2014-4-3 09:21
回复
真水无香
的帖子
6 k" ^' C0 }( v, l: G$ ^# Z
2 H4 C3 a/ }, e3 y6 z
如果未添加血浆也出现这种情况呢？
作者:
xb141939
时间:
2014-4-3 14:57
应该是细胞聚集在一起，还有死细胞和细胞碎片也容易聚集。你吹散了看看。
作者:
lyj-0017
时间:
2014-4-8 10:22
回复
xb141939
的帖子
+ z8 c( {/ p4 f, e6 w7 k3 D+ q( v
7 o; d' U: o9 C* u( D9 |5 O
关键是吹不散，所以才疑问嘛，你遇到过吗？
s. h% q9 q! O! Z- O8 d
作者:
deshenglll
时间:
2014-4-8 10:32
回复
lyj-0017
的帖子
( I) D2 @ G" C H
! g/ i7 a: A! g. L# ?' M8 s' m
换液的时候直接吸出来，有可能是死细胞。我们也遇到过多次。
作者:
yanwu_1
时间:
2014-4-9 16:12
可以尝试一下血样再ficoll分离一下，去除残余红细胞。细胞在生长旺盛的时候有过这种情况。但第一二天就这样，没遇到过。看图片，似乎是红细胞或幼红细胞的影响。
作者:
lyj-0017
时间:
2014-4-9 17:39
回复
deshenglll
的帖子
4 `* w1 B- i) _) P. s3 j. `
9 b1 z) S2 z2 P$ i0 P
r如果成团比较大也还是吸出来吗？这样的话剩余的细胞量就会少不少的
作者:
lyj-0017
时间:
2014-4-9 17:40
回复
yanwu_1
的帖子
* V6 m2 x2 X! ]
2 `& h: Y( W, {9 ]7 M
你的意思是，可能是一开始分离的单个核细胞中混入的红细胞太多？后续培养过程中红细胞裂解导致细胞成团聚集？
作者:
shamoye
时间:
2014-4-25 15:45
回复
lyj-0017
的帖子
4 ]8 _, @4 X" }+ f, x# p4 ?) o
4 t; t1 |9 ~. h& e
有的就算没有红细胞也会出现的
作者:
lyj-0017
时间:
2014-4-26 20:11
回复
shamoye
的帖子
+ C2 s2 G* S2 S' {; N6 |8 v0 s
1 g6 D6 t* }! F2 R3 q5 \
为什么？那是什么原因引起的呢？
作者:
lyj-0017
时间:
2014-4-26 20:12
回复
shamoye
的帖子
2 \6 N. o6 N j* q
7 V) ~9 S8 H/ k7 P: f% m
为什么？那是什么原因引起的呢？
作者:
yizuiqiannianga
时间:
2014-5-12 12:47
我感觉应该是死细胞造成的，我们也遇到过这种问题，脐血的出现过两次，估计是可能抗凝剂造成的细胞伤害，一般都用的枸橼酸钠，另外就是病人出现过几次，可能是因为病人细胞本身质量就不好，养着养着就死了，成絮状之后细胞就根本不长了，还有就是我曾经把一瓶细胞就那么放着一直放到细胞全死了，就出现那种絮状物，一样一样的，哈哈，所以我觉得是细胞死亡原因。之前救过来一次，就是离心，先低速把絮状物去除，然后又离心把剩余的细胞离下来，继续培养。我觉得和血清没什么关系，因为我们一直就没用过血清
作者:
lyj-0017
时间:
2014-5-12 21:29
回复
yizuiqiannianga
的帖子
, E9 g# g: S$ u! _6 o$ ^
$ C3 q. ^# l/ U" _
我们现在认为更多的是跟病人自身状况有关，少部分跟技术员的经验有关。
作者:
long3390hai
时间:
2014-5-26 10:47
回复
lyj-0017
的帖子
3 j2 D, y& t1 E/ ?
* I B) q" n% }7 H* K3 N: h
你没在显微镜下观察一下，看看是否染菌，细胞形态如何
作者:
牵着蜗牛去散步
时间:
2014-5-28 09:52
培养的过程中等到10天左右，絮状会逐渐的减少，甚至消失，不是染菌。
作者:
lyj-0017
时间:
2014-5-28 11:45
回复
牵着蜗牛去散步
的帖子
: M$ | U, ]# `' ?5 g' y( @
, b: Y5 T+ ?+ e9 x. [& _/ `
在培养的过程中不可能不动细胞吧？如果不动细胞，过几天有可能絮状物自动散开，但是如果每隔2-3天加液或者换液，絮状物就不容易散开，这也是个问题
作者:
牵着蜗牛去散步
时间:
2014-5-28 14:08
回复
lyj-0017
的帖子
8 j% l; h% ]- |& P9 W
, g: N( L" j4 O; T. A# v% r
在培养的过程可以动细胞培养袋，需要加液的时候就加液，需要观察的时候就观察，如果你加的是血浆，很有可能是血浆中的纤维蛋白原，与培养液中的ca离子相互结合，形成的絮状物。
作者:
李雪莲
时间:
2014-5-28 16:43
可能是细胞太多就聚团了，轻轻拍打细胞袋。但很可能是细胞状态不好，成絮状了。
作者:
lyj-0017
时间:
2014-5-30 15:20
回复
牵着蜗牛去散步
的帖子
4 p8 k# F5 X4 @# x
; Y2 m g- B6 g! _ m6 z, U; Q
你说的很有道理，那也就只能把分离出来的单个核细胞多洗几遍，尽量去除血浆中的蛋白原类物质了。还有别的可能的原因吗？
作者:
lyj-0017
时间:
2014-5-30 15:20
回复
李雪莲
的帖子
6 ^ s5 L) O, d. P8 ]
, B3 [5 J! ~6 I" c! A& {- |4 Q j5 w2 ^
细胞状态不好可能是什么原因呢？
欢迎光临 干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)
Powered by Discuz! X1.5
