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标题: 请问新鲜组织做PCR怎么保存 [打印本页]

作者: 请叫我晓白 时间: 2013-6-19 16:00 标题: 请问新鲜组织做PCR怎么保存

本帖最后由请叫我晓白于 2013-6-19 16:15 编辑 1 Q1 w p! w5 v; @2 }

我要做大鼠心脏组织的RT-PCR，请问可以取出心脏后用生理盐水洗干净后切取组织马上称量100mg，然后放在含TRIzol的高压去酶的EP管中-80度保存吗？; ^+ ^2 M! M; A7 g7 f* A7 B
心脏有许多血，需要用生理盐水洗干净再取组织吗？有人说要先将组织放trizol里匀浆后再-80度保存，到底是直接泡TRizol还是匀浆后保存好呢？另外我称量组织时用的剪刀是不是也要用DEPC水处理啊？可以不处理直接剪了放Trizol里冻存吗？
另外我准备把其中一部分组织用塑料袋装好-80度冻存备用以后做冰冻切片，这会对抗原活性有影响吗？能保存多久呢？5 i) j1 Z' v; \
废话太多，多谢各位大神帮忙
另补充：我们没有液氮，只有-80度冰箱

作者: zb_ming 时间: 2013-6-20 09:57

组织洗净后直接放处理过的ep管-80度保存。要长期保存的话就要放液氮里。剪刀最好depc处理。日后做的时候再拿出来匀浆。

作者: 请叫我晓白 时间: 2013-6-20 10:14

回复 zb_ming 的帖子

谢谢，要不要在EP管里加Trizol呢

作者: zb_ming 时间: 2013-6-20 10:58

当然加了，这样比较好！

作者: hbs08230 时间: 2013-6-20 13:42

如果是提RNA的sample最好是取出后当天就冰上匀浆，收-80度保存，一月内提RNA。时间拖得越久RNA 的质量越不好。 6 C6 V4 [% d1 O" o( s
如果是要做冰冻切片的话，最好是新鲜取出的sample切成合适的大小当场包入OCT里，马上放干冰上或是冻入-80度。已经冻过的sample再做OCT包埋的话会导致之后的切片效果不好。在收冰冻切片sample的同时可以多收一份做石蜡切片的，泡福尔马林48hrs然后换70%乙醇24hrs，在乙醇里泡着的sample可以保存至少2年。

作者: Life_Tech 时间: 2013-6-21 15:56

回复请叫我晓白的帖子
0 x! Q* n& |+ S& R
做冰冻切片的不宜直接冻存，冻存后形成的冰晶会对形态也有很大的影响。如楼上建议的，OCT包被后再冻存，不过也不宜放很长时间。

作者: 请叫我晓白 时间: 2013-6-22 00:37

hbs08230 发表于 2013-6-20 13:42 - Z" t; m- S& s! \% f' X6 O
如果是提RNA的sample最好是取出后当天就冰上匀浆，收-80度保存，一月内提RNA。时间拖得越久RNA 的质量越不好 ...

5 F r$ m) P3 t3 S$ O: g5 L
多谢这么详细的讲解。请我用4%多聚甲醛固定24小时就送石蜡切片可以吗？可以不用70%乙醇吗。听您的指导，冰冻切片的话我准备买OCT包埋剂包埋后放小自封袋-80度保存可以吗

作者: hbs08230 时间: 2013-6-22 17:24

回复请叫我晓白的帖子* K! R& t+ U9 F" O! d" f# I
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最好是用乙醇，送出去做脱蜡、包埋、切片的话总不能让甲醇一路挥发着吧，而且如果不同时间点收一次实验的样品，只用甲醇就会导致不同的组织在甲醇水中浸泡的时间不一样，组织的脆度也不一样。

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