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标题:
PBMC掺杂红细胞会如何
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作者:
easternliu
时间:
2013-6-25 08:32
标题:
PBMC掺杂红细胞会如何
在吸白膜层的时候吸入过多的红细胞，在培养的过程中会遇到什么样的情况呢？因为脐血红细胞很轻，比较难彻底的分离，有时会掺杂较多的红细胞，大家遇到过没有
作者:
流泪的鱼
时间:
2013-6-25 11:06
如果掺杂少量红细胞，是没问题的，不影响到白细胞的分裂和增殖，到一定的时候，红细胞自行裂解，最后收细胞的时候没有什么红细胞了
作者:
easternliu
时间:
2013-6-25 11:17
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流泪的鱼
的帖子
2 K3 T& G- _4 s* R* ]" v/ z# U; v4 M
; c! Z' j2 d1 G7 l
要是参杂太多呢
作者:
yaolinzhang
时间:
2013-6-25 12:38
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easternliu
的帖子
2 O, c8 [4 ?8 n& o( L
8 S- t3 f1 {; I/ c) b+ v" }
你可以用红细胞裂解液去除红细胞
作者:
easternliu
时间:
2013-6-25 14:32
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yaolinzhang
的帖子
' g! E" F' _/ E- R7 r' R# F6 B7 ?' a! g
/ k& \* b4 ^, t+ H2 Z
我想知道的是，过多的红细胞对PBMC培养的影响。
作者:
yaolinzhang
时间:
2013-6-25 15:12
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easternliu
的帖子
! R3 U* P& H& w, ^+ [. p( z
# G* ?# u% F/ l& H1 F& O9 h) {, L
同意
流泪的鱼
的观点，“影响不大”，可能会干扰计数
作者:
刘艳85
时间:
2013-6-25 15:14
红细胞太多，用显微镜不易观察，据我们的经验，对PBMC的生长影响不利
作者:
小公
时间:
2013-6-25 15:27
红细胞过多，对单核细胞的生长肯定存在影响的，与生存空间都有竞争关系，最好是进行优化分离液和离心参数，我用FICOLL分离脐血，有些标本本身就是容易白膜层混有红细胞。
作者:
easternliu
时间:
2013-6-25 15:53
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小公
的帖子
8 ^: ^6 J5 [0 O# v
3 a7 I) @ j4 `/ Q& c
是的呢，这正是我现在面临的问题，你们离心力大概多少G呢，应该适当提高离心转速吧。混入红细胞后，是否会引起细胞的粘连呢
作者:
呼吸
时间:
2013-6-25 17:11
如果红细胞比较多，用裂解液裂解一下，掌控好裂解尺度。如果红细胞少，就没必要管它，它会自行裂解掉的。
作者:
fay898
时间:
2013-6-25 19:53
贴壁培养纯化细胞，但细胞计数、接种密度上会影响目的细胞的生长~~建议PBMC用红细胞裂解液处理一下再培养吧~
: m. I8 v4 a% R) W! P
作者:
流泪的鱼
时间:
2013-6-26 14:53
如果掺杂的红细胞太多，就用红细胞裂解液处理，但是时间要短，否则影响单核细胞的分裂增殖哦。如果红细胞不太，就不用红细胞裂解液。毕竟，红细胞裂解液也会影响单核细胞。
作者:
流泪的鱼
时间:
2013-6-26 14:55
你的上升和下降的加减速度怎么设定的？掺杂红细胞和离心方式有关。
作者:
流泪的鱼
时间:
2013-6-26 14:55
你的上升和下降的加减速度怎么设定的？掺杂红细胞和离心方式有关。
作者:
easternliu
时间:
2013-6-26 15:13
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流泪的鱼
的帖子
" g9 U: z2 g p+ m, z5 P* l# ]
# X. R& ~! O7 J) n
加速度都是降到最低，这没问题，，谢谢你
作者:
小公
时间:
2013-6-26 19:54
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easternliu
的帖子
0 K- G, S3 X5 z
" r; E) w& p& V; [2 w& K9 C1 g: g
用的GE 的FICOLL ,之前几次是先用淀粉沉淀红细胞，取上清再进行分离液分离，这两次是直接分离的，明显后面红细胞很多，估计是和稀释有关的，稀释倍数低，红细胞密度大，容易下沉，再往分离液加血时候，很快就有红细胞沉降，液面分层不清晰，会影响的，我用的400g,30min ，
作者:
easternliu
时间:
2013-6-27 08:50
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小公
的帖子
& I1 }* |( O! z5 i
5 c6 V+ b |# X l
你是做的脐血么，做外周血用400g30min应该是完全没问题的。看文献，淀粉直接就低速离了（60g10min），或者自己沉降1h，一直没试过用羟乙基淀粉来做，给点建议吧
作者:
weijunning
时间:
2013-6-27 09:03
如果红细胞太多，分离当天用裂解液稍微裂解一下即可，待细胞生长到5天左右，再次进行深度裂解，这样对PBMC的损伤小一些，而且红细胞也更易裂解，裂解效果会好。
作者:
yanwu_1
时间:
2013-6-27 09:16
就我个人的经验来说，少量的红细胞对单核细胞的增值是没有显著影响的；但红细胞太多的话，在红细胞裂解之后，细胞碎片或者（蛋白？）会粘连细胞聚成团，极度影响细胞增殖，甚至会增值不起来。个人经验。
作者:
easternliu
时间:
2013-6-27 09:20
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小公
的帖子
@4 K" D7 y' I9 J; e: {3 S! r4 V8 N
; y6 z- y' g* Q. d) ^" q# Y
能告诉我你们用的什么牌子的淀粉么，一般药用级的可以用否
作者:
easternliu
时间:
2013-6-27 09:22
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yanwu_1
的帖子
7 n: R3 e9 u+ x/ `; S" m
+ T# q [9 ~( `7 N
我现在遇到的应该如你所说，蛮尴尬的，正着力解决这问题
作者:
小公
时间:
2013-6-27 15:51
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yanwu_1
的帖子
+ O) S9 H/ s' a0 o) v8 G$ S
$ P$ z( A+ q' b. C
是的，裂解之后明显很多碎片
作者:
小公
时间:
2013-6-27 15:52
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easternliu
的帖子
% i! _: ]6 {* S% k8 r3 N8 q
2 O9 \5 z: b) G* m* `6 O& w
不是医用的，是沉淀红细胞专用的，羟乙基淀粉
作者:
easternliu
时间:
2013-6-27 16:10
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小公
的帖子
* D0 n+ B3 J6 `, a# J$ Q: E
5 ?" }/ x0 ~6 e, u0 E2 n
哦哦，能推荐一下牌子吗
作者:
meister
时间:
2013-7-18 15:24
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easternliu
的帖子
0 u1 t' M, r: ~, X
) p, m* _+ c6 [0 C, ?7 o
红细胞没有太多影响， 不用管它
作者:
jenvy121
时间:
2013-7-24 16:17
不建议用红细胞裂解液，影响表型，而且会损失很多目的细胞，建议第一次分离后养上3-5天，然后再次分离，这样很多红细胞就能分走了。
作者:
jingjing6837
时间:
2013-8-27 14:14
红细胞多，可以用离心去除一部分，把转数调低一些，只把单核离下来就好，最好不用裂解液对细胞有损伤，要是去不净在用
作者:
wenwen1228
时间:
2013-9-4 22:49
正确操作不会掺杂太多红细胞。，就算有对细胞培养影响不大。因为加的因子都是刺激淋巴细胞分裂增殖的，红细胞几乎不增殖。
作者:
kangyi08321
时间:
2013-9-10 15:50
FICOLL分离比较好的话一般不会参杂很多红细胞，对于楼上所说的血液粘稠度对分离的影响来说，只要不是太稠的话，影响不是很大！个人做分离很多次，分离不好的原因我发现的有这个，所有15 ml离心管分离的话，最好FICOLL和血液的整个体积不要超过10 ml，50 ml离心管处理的话最好不要超过30-35 ml，一般都能得到好的离心效果。还一个如果血液粘稠度比较高的话，血液加在ficoll液面层上不要分层太好，也对后面离心后，白膜层上残留尽可能少的红细胞有一定帮助，但是相对白膜层液面会厚很多（但不是细胞多啊，就是变稀了而已），后面有肯能需要吸更多液体了。1500-2000rpm ，15 min我都用过，差不多。离心机平稳点更好。有空上传下以前我离心的照片，希望对大家有帮助，不对之处，敬请指正。最后希望版主给点包包下载点东西看看。。。。HOHOHO
作者:
aaronbct
时间:
2013-9-23 13:43
I also add Ficol for Red cell depletion. that only remain less than 1% of red cell.
1 r; h& o6 k* d) b: u' q- p6 E( F
作者:
aaronbct
时间:
2013-9-25 09:49
补充资料, 在新加玻一所大学内有一学者做了一个研究, 发现在Wharton JELLY 内培养细胞时, 如果有一些红细胞, 在培养过程中有球捐出了血红素, 会影响细胞附在JELLY 上吸收养份. 这样的细胞活性会很低.
2 b- T* M3 R7 E6 c/ C
4 H0 S2 `7 U* v; I. `
所以他用了两个方法: 一个是: 用一台离心机加FICOL 来分离, 另一个是加美国产的一种溶液, 把红细胞压机降到10 两种成效也不错.
作者:
aochongyu
时间:
2013-10-12 15:14
这个一般没有关系，培养一段时i间，通过不也换液基本上红细胞就越来越少的
作者:
刘艳85
时间:
2013-10-28 14:12
若红细胞过多，影响在显微镜下的观察效果，之后的培养效果也会很差；可以用FICOLL在提取MNC时再分离一遍或是用红细胞裂解液将其裂解，这样虽然会增加操作步骤，但是会有有利于PBMC的培养
作者:
weijunning
时间:
2013-10-28 14:35
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easternliu
的帖子
/ N& R" h! k2 [3 }2 b5 x
6 [3 E" F. L0 H8 g7 ^7 M8 Q
掺杂红细胞一般会影响白细胞生长，由于一开始红细胞比较强壮，白细胞相对薄弱，你可以尝试分血当天先用少量红细胞裂解液进行裂解；培养4天左右或更一些时间（6天），可以将细胞离心收下来，用比第一次量多的红细胞裂解液进行深度裂解，这时候红细胞相对比较脆弱，裂解效果比第一次要好很多，同时白细胞的数量也有所增加变得相对强壮些，裂解液对其影响会减弱，如果一次裂解不太好，可以再次裂解。我都是这么做的，裂解效果不错，细胞长得也很好。
作者:
jianglei_sd
时间:
2013-11-8 14:36
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aaronbct
的帖子
) r# S$ h; H5 |( g0 g, @
7 a& c) ?1 Z8 @2 \5 s4 A: v
能搞到是那种溶液吗？
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