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标题: CIK培养中的细胞因子添加顺序问题！！！ [打印本页]

作者: lyj-0017 时间: 2013-7-8 12:41 标题: CIK培养中的细胞因子添加顺序问题！！！

传统培养方法都是D0添加IFN-r，D1添加IL-2和anti-CD3 mAb，这个工艺大家一般都是首先在培养瓶中培养，几天后转培养袋或继续使用培养瓶培养。
问题1：传统工艺为何必须要首先添加IFN-r，24小时之后添加后两种细胞因子？可不可以在D0天同时添加IFN-r、IL-2和anti-CD3 mAb呢？, G7 Y/ e6 d; m- Q
问题2：是否可以分离出MNC后直接转入培养袋添加细胞因子进行培养呢？ b7 A3 T( E8 l8 \& g+ t$ Z
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期待高手不吝赐教啊~

作者: jxydiandian 时间: 2013-7-8 15:10

之前看过一篇文献，说第一天加IFN-r是为了增加细胞表面的受体对IL-2的结合率，并且增加细胞的细胞毒性，大概是这样，因为是好久好久之前看的文献了，不太记得了，回答有失严谨，请见谅。

作者: jxydiandian 时间: 2013-7-8 15:11

对于第2个问题，是否在培养袋直接培养要看细胞数量的，如果细胞数量太少，在培养袋培养，细胞密度太低，不易于增殖

作者: jxydiandian 时间: 2013-7-8 15:16

补充：在诱导CIK细胞形成过程中加入IFN-γ可降低IL-2 用量,同时IFN-γ加入的顺序与细胞毒活性密切相关, 先加入IFN-γ后加入IL-2 可提高细胞毒活性, 这是因为先加入IFN-γ, 可促使PBMC上IL-2 受体数量增加,从而有效地激活效应细胞

作者: lyj-0017 时间: 2013-7-8 22:23

回复 jxydiandian 的帖子! m1 m1 i) x! c+ }2 S
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如果细胞数量够多呢？比如使用血液分离机分离单个核细胞，这样分离得到的单个核细胞相对较多，这种情况下是否可以三种因子一开始时就同时添加呢？

作者: jxydiandian 时间: 2013-7-9 08:48

回复 lyj-0017 的帖子3 A X% M! P0 Q) {- l
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我觉得你应该把我的回答在看一遍

作者: chslyx 时间: 2013-7-9 10:09

回复 lyj-0017 的帖子

第零天加IFN-R是为了增加细胞毒性，前二十四小时主要是诱导细胞的毒性，加了IL-2的话会影响诱导的效果，，而问题二主要是因为细胞密度问题，因为刚分离出来的MNC会比较少，用培养瓶会增值比较快，因为细胞聚集的话更容易增殖

作者: lyj-0017 时间: 2013-7-9 11:49

回复 jxydiandian 的帖子
& J/ J" g' ?, \, e- @* }2 ^
不好意思哈，一开始没有深刻领悟你的话，现在明白了

。那你认为转袋的细胞密度应为多少比较合适呢？

作者: jxydiandian 时间: 2013-7-9 13:53

回复 lyj-0017 的帖子
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转袋的密度跟瓶扩的密度是一样的，差不多还是按0.5-1*106/ml密度吧

作者: lyj-0017 时间: 2013-7-9 20:12

回复 jxydiandian 的帖子9 a) \+ z4 w- s# V0 L
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嗯，最近就按照这个密度试试，非常感谢啦~

作者: jianmin1979 时间: 2013-7-10 15:37

很受用

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