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标题: 细胞培养基之怪现象 [打印本页]

作者: zxmflying 时间: 2013-7-11 18:47 标题: 细胞培养基之怪现象

本帖最后由 zxmflying 于 2013-7-11 18:54 编辑 ! C3 \/ r1 r$ ]! x
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细胞培养基（含10%Gibco胎牛血清，无抗生素）放在培养箱5天后，在显微镜下竟发现培养液表面漂着许多网状物体（详见图，为纯培养基，未接种细胞），大家有谁也有遇到这种情况吗？这培养基还敢用吗？

图片附件: 纯培养基漂浮层.png (2013-7-11 18:54, 549.03 KB) / 下载次数 691
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=NTM1Mjl8NTgwYjNjZGZ8MTc4OTU0MDQ1N3ww

作者: cn8867567 时间: 2013-7-11 19:38

你确定是培养基里的？我感觉你看错平面了，这个可能是培养皿底部板子的平面吧，就是说你看的是培养皿的底。

作者: ytumuyangren 时间: 2013-7-11 19:58

我觉得像是培养皿底部的裂纹，我们没有单纯的培养基放置那么长时间，我们一般是放置2天就ok了。如果是细菌污染的话，培养基应该是浑浊的，但是看你这个也不太像是真菌污染啊。

作者: 漂泊的风 时间: 2013-7-12 08:13

应该是培养皿底部的纹痕，我也遇到过这种情况，不过不影响细胞培养。

作者: 孙帅帅 时间: 2013-7-12 08:30

你晃动一下培养基看一看黑色的网状物体是否也随着培养基晃动，如果物体只随着培养瓶晃动那么说明是培养瓶上的东西；如果物体随着培养基晃动说明是你的培养基染菌了~~

作者: 我爱火热的冬天 时间: 2013-7-12 08:40

楼上的说的对，你可以晃一下，只要不动说明你看错视野了，重新调，一般培养基不会出现这样的情况，除非是你用过而且有可能是你操作失误导致污染了，要是新买的，最多会有几个杂质，一般不会有问题的。

作者: yuanyan2010 时间: 2013-7-12 08:43

不是污染，时间久了就是会有这种东西出现。

作者: daiying5200000 时间: 2013-7-12 08:44

看样子可能是污染了

作者: sun_happone 时间: 2013-7-12 09:26

血清中还可能有沉淀物质，但应该不是污染，污染的话你放置这么多天，肉眼都能看出来了。

作者: xiaolong 时间: 2013-7-12 10:42

如果你的培养液打开过口，然后又封上，那么污染的可能还是有的，但概率很小，很可能是你的视野焦距没调好，看到的是培养瓶的外底面，我以前这样看过，还有一种可能，就是血清里残存有变性了的蛋白，不过这种可能也很小，如果有，肉眼几乎可以看到

作者: deshenglll 时间: 2013-7-12 10:43

你这培养基都一直放在培养箱里？应该是培养基里的物质沉淀。

作者: hotcell 时间: 2013-7-12 10:44

我感觉你焦距没对好吧，特别在只有液体没有细胞的情况下。

作者: jiojoo 时间: 2013-7-12 10:52

大家不要怀疑拍照的问题了，这种现象我也见过$ w# {0 p1 C) I+ ^& t
培养基放久了，是会出现这种东西的，而且很确定，是在培养基里，漂着的
有哪些有经验的指点下这是什么东西- Q b0 X' n4 c& n7 ]
我是感觉可能是培养基里的蛋白变性

作者: zhanyuxiaolai 时间: 2013-7-12 11:14

不是污染可能是时间久了产生的聚合物对细胞影响不大

作者: changbo529 时间: 2013-7-12 11:16

回复 zxmflying 的帖子

培养时见过这种，多半是由于你的培养瓶没有洗净而残留于瓶底的一些东西，应该和你的培养基没有多大关系。可以再换个培养瓶看看或直接往培养瓶里加入PBS然后再于镜下观看

作者: zxmflying 时间: 2013-7-12 12:01

回复 deshenglll 的帖子
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是一直在培养箱里，应该不是培养基的沉淀

作者: zxmflying 时间: 2013-7-12 12:02

本帖最后由 zxmflying 于 2013-7-12 12:02 编辑
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回复 changbo529 的帖子/ k, \. {2 Y. X+ c9 N; s% E
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培养皿都是corning新的培养皿，换成PBS后就不会有这种现象。

作者: zxmflying 时间: 2013-7-12 12:04

回复 cn8867567 的帖子" V: o3 E5 s8 [7 p* E2 R1 z7 \/ Z

确定是在培养皿上的培养基的最上面，飘着这玩意。

作者: cqstemcell 时间: 2013-7-12 12:14

这种情况感觉就是培养皿自身的问题，空白的培养皿有时候也能看见这种情况。

作者: cqstemcell 时间: 2013-7-12 12:19

就是像楼上说的，你晃一下培养皿看看

作者: zxmflying 时间: 2013-7-12 12:42

回复 daiying5200000 的帖子

虽然晃动培养皿，这些网状物质也会动，但是也不像是污染，培养皿底还是很干净的

作者: zxmflying 时间: 2013-7-12 12:44

回复孙帅帅的帖子

晃动培养皿，这网状结果也会随之飘动。但是是在培养箱放了8天了，如果是染菌的话，那早爆发了。

作者: franklinhg 时间: 2013-7-12 12:57

血清里的蛋白你想想你的培养基和PBS的区别无非就是盐溶液加血清和不加血清的区别。正常的蛋白析出。

作者: lousia04306 时间: 2013-7-12 13:11

这种样子不像是污染了，感觉像是纹路，如果是真菌或是细菌污染在显微镜下的状态不是这样的

作者: songdianyin 时间: 2013-7-12 13:15

很正常，很普遍，不影响培养细胞效果。。总之肯定不是污染。。

作者: arniekyo 时间: 2013-7-12 14:55

血清自带

作者: zxmflying 时间: 2013-7-12 14:55

回复 franklinhg 的帖子
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有可能。应该不是污染。

作者: daiying5200000 时间: 2013-7-12 15:04

回复 zxmflying 的帖子( V9 o) c7 _: e
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也有可能是蛋白变性之后析出，还有就是真菌污染，有些真菌污染不会浑浊培养基的，细菌污染一般会浑浊。

作者: 呼吸 时间: 2013-7-12 15:39

首先，不可能是污染，要是污染的话放置那么长的时间，肉眼早就可以看出来了，其次，出现这种请款一是，你可能看错平面了，二是、有可能你培养基放置的环境或者什么原因，导致培养基内一些成分析出。

作者: PENGMINLBX 时间: 2013-7-12 20:19

我觉得可能是培养基被菌污染了

作者: bibottll 时间: 2013-7-12 21:10

感觉不是污染，我的血清了也有过，但是你这镜下好多啊，是只有一个视野这么多，还是整个皿里都是啊

作者: jjjddf 时间: 2013-7-14 12:53

我经常遇到，是不是培养基没有铺均匀，有的已经干了？

作者: markllq 时间: 2013-7-14 18:48

培养皿是不是铺了基质？比如说matrigel？

作者: monk125 时间: 2013-7-14 19:22

买的血清里有时候会有絮状物离心管里可肉眼见小量沉淀是不是对细胞生长有影响还未见报道

作者: nydfy 时间: 2013-7-15 08:06

应该是你观察的问题，调节显微镜至合适的层面！

作者: heming 时间: 2013-7-15 13:10

估计是血清问题，没有血清的培养基是不会出现这种情况的，也有可能是污染

作者: crazytime 时间: 2013-7-15 13:12

纯培养基的话，污染会看出来的，培养皿干净的话，好像显微镜下观看是点点，你选个空的培养皿在显微镜下看看，排除培养皿的原因，再看看网状物会不会运动，翻转，增长。

作者: 三月桂花香 时间: 2013-7-15 13:34

应该不是污染了吧，看看说明书里面是否有表示，放置久了会出现类似情况~

作者: 小明子 时间: 2013-7-15 21:28

我觉得你是看错视野了，你们是干细胞吗？不像MEF，也不像ES，并且污染的话，细胞团会很厚，颜色与其他细胞也不同，况且你这是均匀分布的。

作者: 小冬子 时间: 2013-7-16 16:04

组织块贴壁法培养细胞时，细胞没爬出来前，会先长出一些类似图中的物质，不过那个是长在组织块周围一圈的，通常我们叫细胞生长晕。再有就是细胞状态非常不好时，也会出现这种情况，应该是老化的细胞分泌出来的一些物质。

作者: 静夜的单簧管 时间: 2013-7-16 18:28

两种情况：1、观察平面不对，可能为平皿底部纹理；2、可能培养基被污染。可以试着调整一下焦距看看，若最后消失则可能是裂纹，若看见这些东西在动则可能是被污染了。

作者: mckf111 时间: 2013-7-16 20:58

sun_happone 发表于 2013-7-12 09:26
: Y5 H. v8 ~& e血清中还可能有沉淀物质，但应该不是污染，污染的话你放置这么多天，肉眼都能看出来了。

同意可能是血清灭活时温度不够或时间过短

作者: 20111109 时间: 2013-7-17 22:40

我前几天看到了这个帖子，然后实验了一下子，空培养液情况下放了3天，毫无问题。

作者: 樱花草 时间: 2013-7-18 14:25

我也曾经做过这个实验，放置时间比你还久，但是未出现你这种状况，但也是有杂质的，是血清里的，你下次可以选择不放血清只弄培养基培养。

作者: linzi214 时间: 2013-7-28 17:01

会不会是盐结晶之类的。最好做一下细胞培养实验，证据更充足。

作者: hustdreamer 时间: 2013-8-11 12:49

你可以多放几个皿，看看是否都存在这种情况。另外，担心培养基影响细胞培养的话，最好先培养一些不重要的细胞看看结果。

作者: cx4236850 时间: 2013-8-13 10:27

经验告诉我，你这个一定看错平面了哈。。。。

作者: neuralstem 时间: 2013-8-15 00:17

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顶这个

作者: 小兔子lp 时间: 2013-8-17 11:42

配培养基前血清最好离心一下，另外上细胞前的培养皿我都用 PBS 润洗一下~

作者: deshenglll 时间: 2013-9-5 09:54

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是培养瓶上的东西。

作者: wangyashuai 时间: 2013-9-5 23:17

这么多天了，不动的话应该不是污染。不放心的话可以再做一次实验。还有就是看看培养箱中的水还有吗？是不是因为蒸发产生的培养基成分析出。

作者: pcljsw2008 时间: 2013-9-11 13:58

是一种沉淀物质，我那个类似你这个，在烘箱化开的时候出现肉眼可见的沉淀物质，晃动或者温度降低就会消失，你可以试试看

作者: moonison 时间: 2013-10-3 00:36

哈哈。。。楼主最好让师兄师姐看下，然后就等着被鄙视吧。。。

作者: jackywangzr 时间: 2013-10-9 14:15

放置一段时间看看，如果没有浑浊，那就不是污染。估计污染的可能性不大。。

作者: wateryong 时间: 2013-10-10 10:37

应该是血清里面的沉淀，在配培养基的时候，不要吸到血清底部的沉淀了。如果是污染的话，培养基应该很明显的浑浊。

作者: gzeb 时间: 2013-10-22 16:01

仔细看了下图片，不像污染。要不就是你看错位置，显微镜调的太近，看到培养瓶底部外面的一些东西，要不就是血清或培养基沉淀物，区分就楼上说的，会不会晃动。如果排除这两种可能，那就再过一两天，如果有变化，增长，那就是污染了。反正前面两种情况都很正常了，培养基能用；第二种情况的话，用之前过滤下吧

作者: bllx58 时间: 2013-10-23 17:01

血清成分$ A( @8 w$ `/ q7 I) A; z# u
请楼主分一部分血清出来看，或者对着光下看血清瓶子里
应该能看到絮状沉淀$ A: u# h. [4 ^! E
) u/ t8 K$ D C& @8 n, T Z
遇到过几次, k4 q! ^! |8 |6 I
即使是同一家公司的血清，批次差异也会非常大
有些血清可能就是会比较脏

作者: 老十 时间: 2013-10-24 17:45

这个不是污染，血清等等都会有沉淀的

作者: 冷释 时间: 2013-10-29 13:18

回复 zxmflying 的帖子
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污染啦，我有过。

作者: 孤野知—少帅 时间: 2013-11-1 09:01

如果单纯是培养基的话应该不会污染，但是要有一个前提条件，你的培养箱是绝对无污染源的，如果培养箱内有其它细胞被污染，很容易造成你的培养基污染。

作者: 流霞淌 时间: 2013-11-4 11:19

这是几倍镜下看的？这有可能是血清里的一些絮状物，也可能是细胞里的一些裂解的残片

作者: gondobar 时间: 2013-11-26 13:52

看具体情况，正如楼上所说，LZ可能看错层次了。如果不是那么可能是血清中出现的，遇到过，不影响培养，培养3天左右会消失。

作者: fenglinzhu 时间: 2013-11-27 15:43

可能是污染了，之前养细胞的时候不慎污染，起初的状态就是这个样子，但培养基颜色正常，取培养基铺血平板才确定长菌了。

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