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标题: 脐带间充质干细胞培养问题 [打印本页]

作者: shuimochunlan 时间: 2013-7-22 14:45 标题: 脐带间充质干细胞培养问题

请教，都知道在脐带间充质干细胞的传代培养中，需要消化后吹打均匀传代，才能生长的好点，我们在吹打的过程中，总是遇到细胞成片脱落，形成膜状，较难吹打均匀，请问造成这种现象的原因是什么？是因为消化时间太短？酶浓度不够还是别的什么原因？怎么解决？（我们是用的0.05%胰酶，消化3-5分钟，在培养箱内消化的）

作者: bj123 时间: 2013-7-22 15:39

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消化时间太长，导致DNA裂解。

作者: lady 时间: 2013-7-22 17:58

额木有遇到过。我们都是稍微变形，就开始吹打。。。木有消化那么长时间...

作者: ytumuyangren 时间: 2013-7-22 18:32

成膜片状，应该是你的细胞长过了，MSC如果培养时间太长，会长成膜片状，这样在消化的时，得到的就是膜片状。所以楼主可以在细胞长至70-80%，开始消化进行后续试验，

作者: shuimochunlan 时间: 2013-7-23 08:49

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我觉得可能是生长过了，我们培养的是养了两天，第三天就开始传代了，要是这样也生长过的话我们就要培养一天半就要传代了

作者: shuimochunlan 时间: 2013-7-23 08:50

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我们也观察的，时间只是预定的而已，不会是消化时间长了

作者: CELL007 时间: 2013-7-23 14:31

可能传代密度高吧。

作者: 三月桂花香 时间: 2013-7-23 14:37

传代密度过高？导致细胞长得太密了吧，消化的时间是不是稍微可以缩短点，我们用的是0.125%四分钟，传代接种是到达78-80%漂浮就传代。

作者: shuimochunlan 时间: 2013-7-23 16:36

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这个是很有可能的，下次考虑两点，一，降低传代时的接种密度，现在是一传二，可以考虑更改为一传三；二，密度不变的情况下考虑缩短培养时间。

作者: shuimochunlan 时间: 2013-7-23 16:40

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细胞长成膜状对细胞的损害到底有多大呢？除了造成细胞过早衰老还有什么危害？

作者: a565170383 时间: 2013-7-26 20:39

胰酶0.125%培养瓶内消化2分钟OK

作者: xiangxu 时间: 2013-8-6 15:35

消化不完全，物理吹打的结果！
用0.25%的胰酶（加EDTA）消化,10分钟以内即可。

作者: 风信子deon 时间: 2013-10-25 17:25

刚刚入门，学习下

作者: cjq12862 时间: 2013-11-8 15:52

考虑两点：
1、是否细胞培养时间过长；& x, t/ q* O9 v6 {- V- Y3 `
2、是否存在污染。

作者: 小样 时间: 2014-4-17 10:22

细胞消化食呈片脱落，可同一代次为什么也会出现？有的呈片有的呈沙状脱落呢？求高人指点。有人说因为细胞密度过大，有人说消化时间长，到底是什么原因呢？？？

作者: 细胞海洋 时间: 2014-4-18 10:11

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作者: 小样 时间: 2014-5-8 15:13

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恩恩，谢谢

作者: 309208770 时间: 2015-3-23 14:01

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细胞长成膜状，是长得太满，消化时不容易成单个细胞消化，培养传代时这样的细胞不容易贴壁

作者: 维维睡啦 时间: 2015-3-23 16:06

原因：你的细胞长过了，没有及时对细胞进行处理造成的。细胞融合率高，细胞排列过于紧密，细胞与细胞之间粘连结实。消化时，细胞成块脱落，粘在一起形成膜状，消化的时间再长也是没用的，反而会伤害细胞。不过这种现象可以继续传代，传代比例可以稍微加大。( f3 c% S! t7 q
解决方法
1、以后培养时，细胞融合率达到80%左右即传代。+ g: w6 q0 V6 p6 ~! y. v# |% }" D
2、加大传代比例。. Y" u6 | v7 u3 x
3、适当减短细胞培养周期。
4、养成经常观察细胞长势的良好习惯，及时对细胞进行处理。

作者: neng172 时间: 2015-3-31 09:25

1、细胞长的太满的，下次长满80%左右就要传达了" S9 s% ]$ P! |
2、或者改用0.25%的胰酶消化

作者: 龘龘 时间: 2015-8-3 00:36

首先，应该是长过了，其次，你的消化液浓度较低，导致消化时间偏长，把消化液浓度提升到0.1左右，这样你就不需要在培养箱中消化了，尽量减少消化时间，消化过程对细胞有伤害的。

作者: 蚂蚁上树 时间: 2016-2-26 14:57

本帖最后由蚂蚁上树于 2016-2-26 14:58 编辑 2 I5 T( \* M3 n- h
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消化时，细胞成片掉下一般是细胞长过了，建议根据细胞生长速度估计传代时间，一般间充质干细胞状态比较好的话，要尽早传代，还有就是胰酶的浓度是不是太低了，我们一般都是用0.25%胰酶消化，脐带间充质两分钟消化就差不多了。

作者: 13153546906 时间: 2016-8-12 14:04

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这么高的浓度，应该1-2分钟就可以了吧

作者: 13710232281 时间: 2016-8-26 17:01

我听过说养间充质干细胞，宁可消化不充分，也不能过度消化

作者: winstonsee 时间: 2016-9-30 15:12

传代密度过高、胰酶消化时间过长都是原因吧，刚开始做的建议在显微镜下观察，接种密度和消化时间对细胞的生长都很重要，接种密度过密导致生长抑制甚至分化，过稀导致生长缓慢甚至老化，胰酶消化时间过长会导致细胞损伤，影响细胞的生长

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