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标题: CIK 培养血清问题 [打印本页]

作者: meister 时间: 2013-7-22 15:31 标题: CIK 培养血清问题

免疫细胞治疗大家都说用无血清培养基。有做过添加FBS和不添加的对比吗。无血清培养临床应用是否可行？

作者: weijunning 时间: 2013-7-22 16:14

回复 meister 的帖子% w3 r- ]3 H( T
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无血清培养临床上当然可行了。并且无血清要比用FBS培养的细胞数量和细胞有效免疫表型上有很大提高，我们做过此对比。

作者: xiakexing 时间: 2013-7-23 08:44

现在临床上一般都提倡甚至要求无血清培养，好的无血清培养体系培养的细胞无论是在细胞数量还是细胞细胞质量上，一般都不低于甚至高于FBS培养体系，无血清培养基的优点：
1. 可避免血清批次间的质量变动，提高细胞培养和实验结果的重复性。 $ i, L% r0 Y8 ], o3 \( w7 _
2. 避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染。
3. 有利于体外培养细胞的分化。 " t2 o+ y1 X. W4 C3 P- F
4. 可提高产品的表达水平并使细胞产品易于纯化。 + Z/ s) U, M$ K" o) ^5 \
5. 组分稳定，可大量生产。; {* ^  g' a0 |; y5 C
6. 不含有丝分裂原抑制剂，可以促进细胞增殖。3 p$ |, V5 A7 B8 z% Y& j7 K
无血清培养基的缺点： ' I7 Z$ r4 C, W/ S; m9 }* x
⒈ 细胞在无血清培养基中易受某些机械因素和化学因素的影响，培养基的保存和应用不如传统的合成培养基方便。
2.  成本较高。
3. 处于发育的不同分化阶段的细胞(例如干细胞与定向前体细胞相比)需要不同的配方，对生长因子和细胞因子的选择尤为重要。而且在去除血清的同时，也去除了一些血清蛋白具有的保护、解毒作用，因此对试剂、水的纯度和仪器清洁度的要求更高。, Y/ k5 d+ P. p

作者: meister 时间: 2013-7-23 13:38

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你们是完全不加血清，还是加自体血清呢。我们比较了一下，不加血清的情况下，无血清培养基扩增效率明显降低。

作者: 呼吸 时间: 2013-7-23 13:49

我们做的是用无血清培养基然后加少量自体血清，效果很不错。

作者: meister 时间: 2013-7-23 14:03

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5 _" U9 v* d( I: `2 l8 r
自体血清不是很稳定而且数量受限啊，你们怎么解决呢？尤其是癌症晚期的患者，自体血清可能质量更差。

作者: weijunning 时间: 2013-7-24 09:08

回复 meister 的帖子* i$ }$ P- k, U0 t1 K% b

我们只是在培养的前六天加一些自体血清，顶多40ml。

作者: meister 时间: 2013-7-24 11:13

回复 weijunning 的帖子# W+ p9 F Y4 A' Z

前1周加血请，后些天不加，到也可以，我们尝试过，效果略微差些。

作者: meister 时间: 2013-7-24 15:47

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- I: e6 _1 X2 u. Q; `+ W& G
其实所谓的无血清培养，只是自体血清培养，也可以说是低血清培养。完全不加血清估计是不行的。

作者: jianglei_sd 时间: 2013-8-9 14:51

回复 meister 的帖子, e+ D* }, x; A/ \
8 w6 X/ K: m+ u- e [
我在培养的时候发现前一周细胞的增殖不是很明显，反倒是一周后快速增殖，可不可以反过来前一周不加或者少加，一周后再添加自体血浆呢？

作者: meister 时间: 2013-8-12 08:45

回复 jianglei_sd 的帖子
# y# y2 Z+ Z) Z z% d
翻过来，你可以试试，应该不行。扩增前期比较重要。

作者: jiefengbing 时间: 2013-8-14 11:22

回复呼吸的帖子

请问您加自体血清，采血的过程中用的是哪种抗凝剂？

作者: jiefengbing 时间: 2013-8-14 11:23

回复 weijunning 的帖子$ g1 B; k. {7 ` i+ L

请问您加自体血清，采血的过程中用的是哪种抗凝剂？

作者: weijunning 时间: 2013-8-14 11:49

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枸橼酸钠

作者: jiefengbing 时间: 2013-8-14 16:14

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如果您用枸橼酸钠作为抗凝剂，自体血浆中会残留一部分抗凝剂，在培养细胞过程中会结合培养液中钙离子，请问你采血一般多少ml?自体血浆中残留的枸橼酸钠对cik表型及数量有一定影响，你有做过这样的观察吗？

作者: weijunning 时间: 2013-8-14 16:17

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我们的采血量一般在80ml左右。将血浆灭活高速离心后的上清用于培养细胞使用；你说的很对，会结合培养液中的钙离子，所以我们会补充一些钙离子进去。

作者: gejianyun 时间: 2013-8-14 16:27

目前来看，CIK的无血清培养已经很成熟了，也有很多商业化的无血清培养基，且已用于很多医院的临床。从效果来看，现有的无血清培养基在扩增数量、细胞质量和功能等方面均要强于传统的有血清培养体系，更别说安全性了。因此，目前要是研究CIK培养体系，主要也就是开发更好的无血清培养基了。

作者: jiefengbing 时间: 2013-8-15 08:14

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请问您钙离子怎么加进去的？多谢指导

作者: wenwen1228 时间: 2013-9-4 22:57

回复 jianglei_sd 的帖子& ^/ E- ~0 L/ e f& V9 M$ r

前期加自体血浆其实对细胞增殖作用更大。后期加不加影响不大。

作者: wenwen1228 时间: 2013-9-4 22:58

完全不加血清细胞增殖很慢。还是加一点自体血浆有利于提高细胞数。

作者: luyoude 时间: 2013-9-22 16:36

分离单核细胞时加20%的自体血清(有多的血清第二天补液的时候全部加进去），后面就只用无血清的，长得很好！

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