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标题: 细胞污染，急问！ [打印本页]

作者: 20111109 时间: 2013-7-23 09:08 标题: 细胞污染，急问！

细胞建系第12天，昨天传代的，今天早上去观察，发现，液体里有好多好多黑黑的点点，请问，会不会是细胞碎片呀。。。。呜呜，千万不要是污染，我要死了。* @; s+ |- j ~* K" e
稍后上图。

作者: daiying5200000 时间: 2013-7-23 09:30

至于黑点，可能使“黑胶虫”，蛋白质沉淀，细胞碎片或者是真菌了

作者: heming 时间: 2013-7-23 09:38

应该是污染了，不会突然一下子出现很多的黑点的。就算出现也是其他不易发现污染造成的。你可以做个摇菌实验，或者检查一下支原体污染，黑胶虫污染。

作者: 20111109 时间: 2013-7-23 10:17

本帖最后由 20111109 于 2013-7-23 10:27 编辑

不用上图了，肯定是污染了，我都看到黑黑的东西在动了。。。' v$ o: L" }) k( L4 A7 v7 P
那么，细胞污染了，该如何救呢？因为细胞很重要。有没有拯救的方案呀。。。还是只能丢弃了

作者: daiying5200000 时间: 2013-7-23 13:31

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听说黑色的东西在动是黑胶虫做布朗运动，以前的论坛大侠讨论的。看你用的是什么血清，国产的话很容易出现这样的问题。

作者: 20111109 时间: 2013-7-23 13:51

回复 daiying5200000 的帖子; d; L2 Q* G# {; Q& R2 {
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补充情况：我同一批还传了另外一批细胞，那个细胞状态是很好的，没有异常。所以，应该不是培养液的问题的。

作者: ymt312 时间: 2013-7-23 13:57

我以前养细胞时曾经看到细胞里有很多黑色的小点，不知道你的是不是这种。我建议观察一下细胞的状态，换一下液看看，还是不好的话这瓶细胞就放弃吧，因为细胞状态不好，会影响以后的实验效果。

作者: daiying5200000 时间: 2013-7-23 14:12

回复 20111109 的帖子7 C% Y2 Z* K+ d5 Y+ u$ g }7 R" p: q

哦，那就丢了吧

作者: 20111109 时间: 2013-7-23 14:20

回复 daiying5200000 的帖子

就这一个了、、、、呜呜木有了再要就要重新原代建了。。。

作者: 20111109 时间: 2013-7-23 14:22

回复 ymt312 的帖子

细胞的形态还是正常的

作者: ymt312 时间: 2013-7-23 14:27

回复 20111109 的帖子
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我也是养原代，理解你！但是这黑点我也不好说是什么，可能污染的几率很大。不行的话换液等一天看看，实在不行只能扔了。

作者: daiying5200000 时间: 2013-7-23 14:45

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你的另外一批状态良好的细胞是跟你这批问题细胞同一瓶传过来的么？培养基是用的同一瓶么？那么培养瓶是不是也是一样的呢？如果只有这批细胞的话就多用含双抗的PBS洗几次，再传代试试看了，用新培养瓶和你那瓶好的培养基试试看，可以在培养基中加些双抗，要是还是那样的话就没办法了，重新提取细胞。

作者: wbj1983 时间: 2013-7-23 14:57

回复 20111109 的帖子) c5 P" m( @ B3 C$ l" c& K- [

根据你的描述很可能是污染了，所以培养细胞的时候一定要注意细节，一定在无菌条件下操作，这很重要，包括所有的操作和培养液成分都需要无菌环境！

作者: 20111109 时间: 2013-7-23 15:33

回复 daiying5200000 的帖子
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不是同一瓶细胞，培养基是相同的。我现在用PBS加双抗洗了2遍，加双抗继续培养着，4h后看看状态吧，不行的话，就重新传代到新的培养板上去。这样做应该可以吧？。。。

作者: 20111109 时间: 2013-7-23 15:44

本帖最后由 20111109 于 2013-7-23 15:49 编辑
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决定还是把图贴上，这是经验教训啊。。。。

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下面是换过液体以后高倍镜，细胞的状态还是很好的。& v# q- v. W/ x6 a8 P7 d
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跪求这到底是什么污染。。。。

作者: deshenglll 时间: 2013-7-23 15:58

看到图了才好发表观点

作者: daiying5200000 时间: 2013-7-23 16:29

似乎已经污染了，不是碎片也不是黑胶虫

作者: 孙帅帅 时间: 2013-7-23 16:37

如果确定是污染，为了保证其他细胞的安全，还是把实验室熏30min臭氧，把培养箱也灭一下菌。还有就是你可以每隔五代冻存一批细胞，这样就不至于突然染菌还要从第一代开始养！

作者: 20111109 时间: 2013-7-23 16:44

回复 daiying5200000 的帖子$ }8 B# P/ h" O" V+ O1 w9 Z3 r

那是什么呢。。。

作者: 20111109 时间: 2013-7-23 16:44

回复孙帅帅的帖子7 X, U: j+ p! j4 L. f3 ^
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这个是第二代。。。。

作者: 20111109 时间: 2013-7-23 16:45

回复 deshenglll 的帖子! q& r9 K) P1 ?$ R5 N }8 r! r
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第15楼上图了

作者: 孙帅帅 时间: 2013-7-23 16:46

回复 20111109 的帖子: X* O# n/ ?. x) y) S

好吧！~~ 我想多了！

作者: 20111109 时间: 2013-7-23 16:49

回复孙帅帅的帖子

不过第一代可以冻起来么？虽然这个才12天，不过这个关系到我什么时候休假的问题呀，建不好我就走不了了呜呜呜

作者: 孙帅帅 时间: 2013-7-23 16:58

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你养的是什么来源的间充质干细胞啊？我们冻存过第二代的，第一代细胞数比较少。

作者: 20111109 时间: 2013-7-23 17:04

回复孙帅帅的帖子
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是精原干细胞。。。

作者: 孙帅帅 时间: 2013-7-23 17:10

回复 20111109 的帖子9 ^, i* U* U& [( i8 ]
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这个真木有养过~~ 这个细胞还铁壁啊~ 怎么看起来很像半贴壁的肺癌细胞！要不你做个冻存实验~~

作者: 20111109 时间: 2013-7-23 21:29

回复孙帅帅的帖子

冻存实验是什么意义这个细胞张在mef上的

作者: 20111109 时间: 2013-7-24 09:15

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作者: deshenglll 时间: 2013-7-24 10:50

回复 20111109 的帖子3 y+ B% P0 X# d
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操作上注意点吧。一般不会太容易污染啊。

作者: a565170383 时间: 2013-7-26 20:36

果断重养，果断无血清培养基

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