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标题: DC细胞数量 [打印本页]

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作者: meister    时间: 2013-7-24 13:33     标题: DC细胞数量

这次DC细胞培养比较成功， 30ml血，养了4*10的7次方DC细胞。 好像个体差异很大，大家有什么好方法，晒一晒。0 u: @( f0 s3 d" g& T3 u
我们用的经典的方法。IL-4， ＧＭ－ＣＳＦ共同诱导。

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作者: jenvy121    时间: 2013-7-24 14:07

不知楼主的成功是如何得出的结论，是流式表型鉴定？不知楼主用的哪几类抗体，是否可以共享。是全血分离单个核细胞后直接诱导的吗？

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作者: woosheng    时间: 2013-7-24 15:02

DC也会体外增殖吗？不是由PBMC的单核细胞被诱导分化成熟而来的吗？

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作者: jihaijie    时间: 2013-7-24 15:15

DC不会增殖，由前体细胞分化而来。

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作者: meister    时间: 2013-7-24 15:28

回复 jenvy121 的帖子
) I% j/ ~7 x0 ^! P# F* y: m9 t6 C, |9 ^5 l+ ]7 l$ y8 |/ Y
检测了流式，CD-1a FITC" Y1 e( E) d6 v  I
CD-11c PE
3 P3 }* i$ N/ j% R* n9 S2 rCD-40 FITC' u2 e# F$ x7 K0 |) `$ s. z
CD-83 PE
: Y& X! o( g6 R) K# UCD-86 FITC7 ~( _5 c: t/ w$ r7 s# [! u  W
HLA-ABC PE  a6 D2 g9 C4 i  y5 i4 B) P6 s
HLA-DR FITC
" O3 ?7 e" h( q6 h阳性率刚刚的

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作者: meister    时间: 2013-7-24 15:28

回复 jenvy121 的帖子
/ y8 x0 H; _8 a6 Q7 M. D, D; E5 n0 v; w+ ?
嗯， 全血分离诱导

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作者: meister    时间: 2013-7-24 15:29

回复 woosheng 的帖子
" l0 g5 }& ?. }4 v: x/ |9 j1 U. W5 J
DC可以增殖， 只是增殖的能力有限

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作者: meister    时间: 2013-7-24 15:32

回复 jihaijie 的帖子& {7 p+ S! E4 q
" F9 u/ Z4 u4 F) ~8 O  N( X9 s- s
DC由单核细胞诱导而来， 在诱导过程中有增殖， 会形成克隆样结构。

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作者: meister    时间: 2013-7-24 15:40     标题: DC流式分析

& [7 c. N9 Q  i& m

2 b! ?7 B9 Y1 y! T回复 meister 的帖子
, Z5 k$ q8 o- |+ j( }
- `$ R7 p$ U  q1 V        CD1        CD11        CD40        CD83        CD86        HLA-DR        HLA-ABC9 G7 S- t& v/ k+ @/ P( x* @
        58-75%        99-100%        97-99%        64-84%        84-99%        97-100%        72-97%
# L! z, Y" ~8 q( N8 p4 h

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作者: jenvy121    时间: 2013-7-24 16:20

回复 meister 的帖子1 o/ c$ f- Z  _

/ y) K4 K" V7 x8 f9 N5 C你用的谁家的因子啊，做了几次重复了？能不能给点借鉴啊，我们咋一直养不好

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作者: yinfuhua    时间: 2013-7-24 19:43

回复 meister 的帖子, }( c- J# C$ R9 _6 b4 t9 ~
* N/ r3 F) J6 R2 z  n4 K1 `
真的不错。

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作者: lyj-0017    时间: 2013-7-24 20:11

回复 meister 的帖子
$ g0 ?5 P$ i+ \- |  n2 i) P* W
# e: G) o8 |( r" M$ q不可思议的结果，30ml外周血能分离出多少单个核细胞呢？这是其一；其二，DC是不能增殖的，单个核细胞中的单核细胞也是不容易增殖的，况且，到现在为止，单核细胞增殖在国内外也是个问题，所以你的结果我表示怀疑~

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作者: meister    时间: 2013-7-25 13:40

回复 lyj-0017 的帖子
7 f2 h- O: A9 [6 K% @# `" U( X9 I# ?2 g# Z+ I
4*10的7次方是最多的一次。 呵呵，一般能到1*10的7次方以上。健康成人的血样，不是病人的。

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作者: lyj-0017    时间: 2013-7-25 16:33

回复 meister 的帖子& _- M7 O3 y7 a: t$ j9 i
& ^$ n; D( o" Z/ N
健康人30ml外周血能分离出大概3 X 10^7个单个核细胞（健康人1ml外周血约能分离出1 X10^6个单核细胞，详见论坛内讨论），再按照健康人外周血血象中单核细胞约占3~10%，DC约占1%，因此外周血中单核细胞与DC所占比例在11%左右，假如按照你所说的能分离出4 X 10^7个单个核细胞，那么由单核细胞诱导成的DC以及外周血中自由DC总数约4.4 X 10^6个，怎么可能培养出4 X 10^7个树突状细胞来呢？不知我说的对与不对？还请指教~

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作者: meister    时间: 2013-7-26 08:50


. U, E+ `4 ~8 w9 I# L5 j! d8 v7 t+ J) ]( L- g
回复 lyj-0017 的帖子
7 q1 [) u- v, _+ m* {4 o( `
3 l* `' i- ]- d有个问题你没有明白，单核细胞是可以增殖的，只是增殖效率不如其他的细胞。
( b+ y- f* N! L; ?) p  pDC培养过程中可以见到明显的克隆形成。

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作者: lyj-0017    时间: 2013-7-26 13:22


# D& w9 B. e9 t
. X) p  R% f  R0 g2 }6 a+ j7 w回复 meister 的帖子6 ^0 {2 Q  t/ n7 L4 o; R; C3 [
/ w4 p7 N0 N; q( R( \
嗯，同意你的说法，我查查文献看看再说吧

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作者: 呼吸    时间: 2013-7-26 15:08

楼主，您30ml血可以分离出多少PBMC，可以诱导出这么多的DC，望不吝赐教，谢谢。

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作者: meister    时间: 2013-7-29 08:54

回复 呼吸 的帖子& U" y- p$ S3 ]! M
2 V, \+ X# L1 T- E% ^/ E7 `5 M
一般能达到30ml血能达到3*10的7次方， 有时比较多， 可以达到6*10的7次方。

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作者: jianglei_sd    时间: 2013-8-9 14:23

是在诱导DC的过程中，单核同时也在增殖吗？另外，不同厂家的细胞因子效果也不太一样，您是用的哪家的细胞因子呢？

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作者: cantonchn    时间: 2014-12-22 22:59

怎么才30ml血？没用血分离机吗

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作者: chlbbc8611    时间: 2014-12-23 10:22

单核细胞在培养过程中有增殖，自然有DC前体增殖，通过诱导成为成熟DC。

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作者: xyz2120091064    时间: 2015-1-6 10:18

请教楼主，你说细胞个体差异很大，是指哪方面？您在计数时是手动计数还是仪器计数

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作者: wangyi111    时间: 2015-12-10 16:56

楼主，你流式取得是悬浮细胞，还是悬浮加贴壁细胞

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