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标题: 请问这是什么污染？如何挽救？ [打印本页]

作者: lmh_yixue 时间: 2013-7-30 13:21 标题: 请问这是什么污染？如何挽救？

请问这是什么污染？怎么挽救细胞？是支原体吗？用什么可以杀死而不影响细胞

作者: sdwzg119 时间: 2013-7-30 13:30

不管是什么样的污染，细胞是没救了........扔掉吧

作者: 20111109 时间: 2013-7-30 13:32

哎，又有一个悲剧污染的。。。请问你这个是几倍镜？

作者: lmh_yixue 时间: 2013-7-30 13:34

回复 20111109 的帖子
0 ~5 o0 z. Y8 Q) N8 U, q* b
400倍，但是细胞似乎还活的挺好

作者: lmh_yixue 时间: 2013-7-30 13:35

回复 sdwzg119 的帖子
- l q) o6 v" q0 D
不舍得扔掉呀，有没有解决办法？细胞看着活的挺好的，培养液也是红色的

作者: 20111109 时间: 2013-7-30 13:40

我建议你扔掉，上周我也经历了第一次污染。。。细胞没有任何问题，好好的，但是第二天，黑点点越来越多。。。最后还是扔掉了。不然会影响其他细胞已经污染培养箱。我现在虽然清理了培养箱和操作台，但是心里还是毛毛的。。。。担惊受怕的怕还有什么地方存在污染。。。哎，一失足成就是这个样子的

作者: 20111109 时间: 2013-7-30 13:41

但是我的老师说，用PBS＋双抗洗，然后培养液里加双抗是可以挽救的，但是这样子留下来的细胞自己都不敢用。

作者: 20111109 时间: 2013-7-30 13:42

因为正常培养SSCs是不加双抗培养的，所以特别特别的容易污染

作者: lmh_yixue 时间: 2013-7-30 13:43

回复 20111109 的帖子: n- O, l8 z: g- c0 Y/ d$ E

恩，我试试。这个细胞好不容易养出来的不舍得扔掉，至少可以用来做PCR。

作者: lmh_yixue 时间: 2013-7-30 13:47

回复 20111109 的帖子4 M& B' \7 b6 o( ]* [6 l. R% {4 i

你在养SSC呀。我这次真是倒霉了，种于遇到细胞污染事件。

作者: 20111109 时间: 2013-7-30 14:42

回复 lmh_yixue 的帖子

嗯伺候细胞这种事情都能游刃有余的话。。。以后伺候婆婆一定不在话下了~~

作者: qiushuiwuhen 时间: 2013-7-30 16:35

强烈建议废弃，我再4、5曾有两次污染，现在想想都是触目惊心，当时很可惜细胞，用还有高浓度的双抗去挽救，结果还是不行，并且恐怖的是可能会污染培养箱的其他细胞，所以建议你扔掉，全当是一次教训，再牛的人，谁不是从当年的污染走来的，加油

作者: heming 时间: 2013-7-30 20:30

应该不会是支原体污染，支原体污染在40X10的镜下是看不见的，必须做相关的检查才能知道。这个估计是什么杆菌污染，没得救了，重新找新的细胞吧。

作者: deshenglll 时间: 2013-7-31 11:27

像杆菌啊。这么多，估计细胞没啥用了。之前我们也尝试过补救，可以是到冻存的时候就污染了。从新做吧，前期的消毒处理很重要。祝你好运。

作者: bioaizhiying 时间: 2013-7-31 15:47

lmh_yixue 发表于 2013-7-30 13:21 3 R8 g1 |1 ^4 i$ K* N `* {( |8 k1 |* s
请问这是什么污染？怎么挽救细胞？是支原体吗？用什么可以杀死而不影响细胞

可以肯定的说不是支原体污染。这种污染我遇到过，和你描述一致。曾用pbs双抗洗过4遍后换液，并加2倍双抗接着培养过，不过仍抑制不了其增殖。
感觉像“虫子”，你这种情况，40倍估计可以看见培养液表面密密麻麻漂着这种“虫子”。
试过加1倍培养液体积的75%乙醇可以很快挂掉这些“虫子”，但仍挽救不了。索性见到这种情况直接扔掉。$ Q" @- R, I. q* ?# A3 i+ I. L
个人感觉细胞传代过多或者培养条件变化，发生这种污染的概率比较大。

作者: lmh_yixue 时间: 2013-8-1 22:04

回复 qiushuiwuhen 的帖子$ Q9 F2 `$ C$ i$ c+ ]

谢谢！！！

作者: lmh_yixue 时间: 2013-8-1 22:05

回复 heming 的帖子
" ?6 I1 N! ]7 ?8 p5 m$ h/ N1 d
谢谢！！！

作者: lmh_yixue 时间: 2013-8-1 22:05

回复 deshenglll 的帖子
7 I7 ~# e- a4 i" j9 Q, }/ @0 v( B; n
谢谢！！！

作者: lmh_yixue 时间: 2013-8-1 22:09

回复 bioaizhiying 的帖子2 L' L7 L* {: t3 T2 X

谢谢！！
这些虫子看着很可怕，但是细胞怎么还一直活着，状态也不错。我把外面没有消毒的离心管放入生理盐水后再将生理盐水培养，今天看到生理盐水里也有这个虫子。我想可能就是消毒问题了，活着操作过程中碰到了外界物。
我们做诱导实验，这细胞在外面养了10天没传代，好不容易诱导出来了却污染了。

作者: zpzp0312 时间: 2013-8-2 09:16

你用PBS彻底清洗培养物若干次，一定要洗的自认为很干净，然后消化成单细胞。随后拿一个96孔板加满培养基。将单细胞悬液吸取少量放在第一个孔里，混匀。再从第一个孔吸取少量转移进入第二个孔，依次稀释。
最后，你可能会获得无污染的细胞培养物。7 h. d* Q: ^4 H- U4 k8 h( w
另一个方法就是将细胞消化后，稀释到较低的细胞密度，使用显微操作仪收集单细胞并转移进入新的培养皿。一定要在最高倍数进行操作。拉针要尽可能长，前端过度要缓，尽量多吸取单细胞并避免吸入细菌。

作者: 沙漠狐o0 时间: 2013-8-3 11:06

不知道是什么污染，肯定不是支原体就对了，支原体要到电镜下才可以看到。

作者: 沙漠狐o0 时间: 2013-8-3 11:06

不知道是什么污染，肯定不是支原体就对了，支原体要到电镜下才可以看到。

作者: lmh_yixue 时间: 2013-8-4 20:26

回复沙漠狐o0 的帖子; ?( U6 l* J! Z, p7 x; i" K; B# S/ j

笑的这么开心!呵呵，谢谢！

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