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标题: 如何选择恰当的细胞分选柱 [打印本页]

作者: miltenyi 时间: 2013-8-23 17:44 标题: 如何选择恰当的细胞分选柱

本帖最后由 miltenyi 于 2013-8-23 17:45 编辑 * g0 y& Y$ k9 s" ^

美天旎的分选柱分几类，如MS、LS、LD级autoMACS column 等，那么，这些有什么区别呢，您在实验中又该如何去选择适合您的分选柱呢？6 _3 u$ l& v2 G, ?0 d
! ]* P4 _5 N! `- y6 C8 ?5 T
首先，让我们来认识一下分选柱：

美天旎的分选柱（Column）是MACS技术的核心，其特点如下：

填充有不同规格的铁珠，可分选或者去除10^7-10^10细胞；0 ^3 b. R l) H5 \0 t2 o1 D
表面亲水包被，不损伤细胞，同时保证流速；. Z1 }6 ^- Y$ w; r+ B
可以将磁场放大1000-10000倍，因此只需极少的细胞表位被识别即可被磁场捕获，从而为后续实验预留足够抗原表位，如磁珠分选后的细胞无需切除磁珠即可直接染流式抗体，而不受影响。! z7 i3 n3 k, S" _) ~0 L3 A4 J

, |3 p  t  Q5 {" z$ U/ ]; d8 W
我们知道，美天旎的MACS分选策略有阳性分选、去除分选，那我们就按两种分选策略来分析如何选择恰当的分选柱：- q3 O% u, a. F# G$ }
$ x7 d) H% B7 x- F
一、阳性分选
1、要分选的细胞数量：, x& R% u9 d/ H1 K0 P* w

如下图所示：MS柱容纳的最大细胞上样量是2×10^8细胞（既包含阳性细胞又包含阴性细胞），而其能捕获的阳性细胞最多是10^7。
  V) w; D, N3 V9 a
如何选择恰当的细胞分选柱
[attach]54881[/attach]+ w; O4 x: [; e( W7 X, [

2、目的细胞是常见细胞还是稀有细胞: Z. m* ?3 O5 R% b/ D/ c6 F/ _

为了在分选稀有细胞（表达频率〈5%）时得到较更高的纯度，您可以使用两个分选柱：用一根分选柱进行一次分选后，阳性成份再过一次新的分选柱。

3、大体积的细胞+ y+ r5 Y0 _* ^3 S" B: t

另外，如果您要分选的目的细胞是体积较大的特殊细胞，如原生动物细胞、人皮肤郎罕式细胞、鼻咽癌细胞、心肌细胞等，那推荐您使用Large cell column。因为大细胞柱的铁珠间隙足够大，容许这些特殊的大体积细胞顺利通过。

二、去除分选
) O( r8 _3 w/ a9 N
去除分选中需要考虑以下几个因素：

1 您使用MACS isolation kits 或MACS microbeads吗？4 Z! C  B7 a, a  l
# x! ^  t% T; }$ c* ^0 @+ V
2 抗原表达强还是弱呢？( w/ m. D+ y! a& x* R- G2 B

3 您需要更高的纯度还是回收率呢？
/ i2 I2 w  i: _; s. C2 T* `
4 您需要分选多少细胞？8 k. a9 |+ M; r+ \
7 N9 P2 I5 E* R$ t4 i
根据这几个因素，您可以按下图的标识来选择合适的去除分选柱。
[attach]54882[/attach]
7 R. o: O0 t0 h  F& c( R9 p
& m- |. e7 Y/ b2 w- _
以上，您知道如何选择分选柱了吗？8 j, f4 \: x1 c9 y! s# H6 I  Z  A

如有疑问，您可以拨打800-820-2606
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或者发邮件macs@miltenyibiotec.com.cn 咨询。

作者: yuanshenyewu 时间: 2013-8-30 14:58

MS用的还是多一点

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