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肿瘤干细胞消化和流式检测如何保持细胞活性
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作者:
412159616
时间:
2013-9-11 16:41
标题:
肿瘤干细胞消化和流式检测如何保持细胞活性
无血清培养的悬浮肿瘤干细胞，能看到细胞的扩增。细胞照片如图：
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[attach]55465[/attach]
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但是用台盼蓝染色计数时，不管是否用胰酶消化处理过，镜下完全是一片蓝色，细胞数量没办法计算。上机做流式，细胞状态也都不好。
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请教大神两个问题，
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1. 悬浮的细胞球怎么能消化成为单个细胞？
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2. 悬浮培养细胞状态是否都不是很好，像我遇到的问题，应该如何解决呢？
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作者:
wuzhouying2132
时间:
2013-9-13 13:05
我觉得你的细胞已经都死掉了，或者已经开始死掉了，因为(用台盼蓝染色计数时，不管是否用胰酶消化处理过，镜下完全是一片蓝色)。
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悬浮培养可以很好，只是不知道你的问题出在哪里？我做的细胞球只是用tip轻轻吹打就可以开，但如果要做facs的话，会在加完抗体之后用filter过滤一下
作者:
412159616
时间:
2013-9-13 17:00
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wuzhouying2132
的帖子
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可是细胞的扩增速度都还是不错的，这又是为什么呢？
作者:
yuanshenyewu
时间:
2013-9-14 09:00
用小皿，直接镜下计数，应该也可以数的清啊
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？或者CCK-8看他的增值能力？
作者:
luyue6453
时间:
2013-9-14 11:41
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412159616
的帖子
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正常悬浮的细胞球，你摇晃几下就会分开，过一段时间有聚集，你要不要弄散了后就加快速度做后续试验？再者看您的细胞长的也不是很好，尤其那个黑团感觉都要死掉了，你确定增殖速度快的细胞是你要的细胞吗？
作者:
412159616
时间:
2013-9-19 22:15
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luyue6453
的帖子
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是养一段时间，出现聚团就用胰酶消化继续养的意思吗？
作者:
luyue6453
时间:
2013-9-21 15:06
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412159616
的帖子
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8 D- W: k" g, ^* X0 G7 M2 q
不是那个意思，总体感觉你的细胞很不正常，悬浮细胞只要聚集在一起你摇晃几下会自动分开，不需要胰酶的，
作者:
412159616
时间:
2013-10-9 13:14
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luyue6453
的帖子
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这样子，是不是干细胞培养，初始的细胞密度最好在50000/mL以下会比较好？我还看到有建议5000以下的。
作者:
linhua188
时间:
2013-10-10 09:31
我觉得你的细胞都死了，黑黑的，而且边缘已经破碎，还有你的细胞培养基里面污染严重！！细胞碎片很多~~细胞计数的话，多吹吹用点胰酶就好了
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还有不知道你怎么看细胞增值的，其实成球状态下细胞增值的不明显的
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作者:
冷释
时间:
2013-10-29 13:07
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412159616
的帖子
) W3 c% y7 e# u$ t
5 Z1 d1 t0 A' ^% X
你养的是悬浮球细胞吗？建议试一下invetrogen StemPro® Accutase® Cell Dissociation Reagent 100 ml，我用的货号是A1110501。我用着效果不错，就是有点贵了，100ml 800多。我之前也用过普通的胰酶，打不成细胞悬液，多吹打几次，细胞就拉丝一样的，细胞传了一次就不活了，后来找到这个分离液。
作者:
冷释
时间:
2013-10-29 13:13
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412159616
的帖子
2 _0 U: x. _, @+ H z* W
% a# G& L% v; B' A
从图上看，细胞状态可能不是很好的。我的经验是，悬浮球细胞养着培养基就是会杂质。一要注意保证生长因子的量，否则容易贴壁，细胞也容易衰老；二. 2-3天可以只加培养基进去，细胞生长状态好了换液传代。
作者:
asterwang
时间:
2014-1-7 09:27
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冷释
的帖子
' T+ j) X5 ^" q% T6 f
2 B! i& R, q9 t) p$ c f3 ~6 u
受教了
作者:
974715506
时间:
2014-1-14 14:18
不错
作者:
maiweiqian
时间:
2014-2-7 22:05
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冷释
的帖子
0 i. a2 ?+ b& S; W1 a8 s/ C7 Z
& S, ^2 B. _6 N4 N3 U; p6 Z, w% C
冷释用accutase的用量是多少呢？大约是多少细胞加多少的分离液？我也买了这个酶，不过还没有到货，用量怎么把握我心里还没有底。求指导。
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另外，你的细胞球消化成单细胞传代之后能否再聚集成球呢？我之前消化的貌似已经不行了。
作者:
涅炎
时间:
2014-2-23 19:42
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412159616
的帖子
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感觉你的细胞状态很不好，黑的应该都死了，建议离心后再重悬。
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成球的细胞应该是不用消化就可以成单细胞悬液的，为了减少吹打导致的细胞死亡，可以少量用一点胰酶，但量要摸索。
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你的细胞状态为什么不好，看不出来，哪个大神看出来指导下。
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我做的乳腺癌细胞成球，请大家看看。
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手机拍的，见笑了。
作者:
yueliangredehuo
时间:
2014-10-28 20:36
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maiweiqian
的帖子
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你好，请问你用accutase消化了吗？效果怎么样。我也才刚开始悬浮培养，不知道如何消化，加多少accetase消化
作者:
细胞海洋
时间:
2014-10-29 07:48
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yueliangredehuo
的帖子
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作者:
yueliangredehuo
时间:
2014-10-29 20:33
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细胞海洋
的帖子
k) C, L! R/ l8 Q- x
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行，没问题
作者:
nyming2008
时间:
2014-11-2 13:46
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412159616
的帖子
: R& a6 x0 e p7 w4 }2 w. s1 e0 N1 u) m
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请问你的细胞多长时间能传代？
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