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标题: CIK细胞培养疑问 [打印本页]

作者: xiangbalao 时间: 2013-9-16 21:16 标题: CIK细胞培养疑问

最近养CIK细胞，细胞总是贴壁，悬浮细胞也少，加入CD3，IL-2，IL-1好像没起到作用，
一直贴壁，吹不下来。而且，加完因子后没有细胞克隆团产生。
还有一种情况是细胞一直不会扩增，养着养着就会凋亡，这会是什么原因？

作者: yinfuhua 时间: 2013-9-16 21:43

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先检查一下培养液，是否为培养悬浮细胞的；再看下细胞因子（进口、国产、因子浓度配制是否合适），对每种因子都要查验。另外，要检查一下培养体系是否有问题。一般来说，培养18-24h应该可以看到克隆团了。

作者: 孙帅帅 时间: 2013-9-17 10:55

你是怎么取的单个核细胞？用的是健康人的外周血吗？还是脐血？培养基使用的什么培养基啊？

作者: xiangbalao 时间: 2013-9-17 11:20

脐血，ficoll离心，培养基 vivo

作者: 大少爷 时间: 2013-9-17 11:48

应该是因子的问题吧

作者: xiangbalao 时间: 2013-9-17 15:45

在线急等，哪位大侠碰到过这种情况，帮忙具体分析分析。。。

作者: meister 时间: 2013-9-18 09:24

回复 xiangbalao 的帖子; y) z5 U `6 u9 F! p b

最大可能是抗体出问题了。
次之IL-2的问题。& F2 w0 U; [$ i6 H) F* q
其他原因可能比较小。# d3 W) w/ x( ~1 y" ^! @, D; _

作者: 淡定的摩羯 时间: 2013-9-18 09:51

建议做一下支原体检测

作者: xiangbalao 时间: 2013-9-18 10:17

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抗体？

作者: 沙漠狐o0 时间: 2013-9-18 10:34

请问培养基中为何要加IL-1呢？# d& ^5 `0 d' ]4 s5 \9 E5 I
培养基中添加因子浓度对了么？CD3、IL-2的浓度有没有弄错？

作者: chenguangyu 时间: 2013-9-18 18:11

单个核细胞提取的量是多少、你接种的密度是多少、细胞因子加的量及先后顺序都有可能有影响

作者: xiangbalao 时间: 2013-9-18 22:23

回复沙漠狐o0 的帖子
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因子浓度没错

作者: jiguojie87 时间: 2013-9-19 08:13

回复 xiangbalao 的帖子3 q5 Y' c# L; u, a8 Z
2 b- k5 L! o' u' M: W2 j( R
从以下几个方面考虑：1、标本来源2、培养液3、因子、抗体4、分离发放5、污染问题。把抗体好好检查检查。

作者: CELL007 时间: 2013-9-22 14:26

我有师弟遇到和你类似的情况。他就是获得的单个核细胞太少，然后铺的太稀，细胞就一直长不起来。

作者: xiangbalao 时间: 2013-9-23 13:17

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收集的细胞也不少，种植密度也不稀

作者: yingjie 时间: 2013-9-23 14:35

想问下你是这一份细胞出现这种情况还是你做的所有CIK细胞都出现这种情况，如果你别的细胞培养的都很好，再找找问题所在就比较容易了，如果所有细胞都如此，换培养方法吧，绝对培养方式有问题。前面很多朋友都提到了原因所在，多想想。健康人的外周血来源或脐血来源的PBMC诱导扩增还是比较容易的，还有现在很多实验室都用配制好的完全培养基，自己配制的也没问题，就是耗时又耗精力还容易出问题。可以说说你的大概培养过程吗

作者: aochongyu 时间: 2013-9-24 14:14

是不是单个核细胞分离效果不好的结果啊

作者: sunny.yc 时间: 2013-9-24 16:09

回复 xiangbalao 的帖子+ J0 O, v& x/ l4 \; A$ T, \( J0 q

我觉得应该是因子问题，当然，你要先确定你提取出的贴壁细胞是单个核才行

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