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标题:
亲们，我这个Western 的目的条带为什么出现了两条带？
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作者:
微笑流滢
时间:
2013-9-18 18:05
标题:
亲们，我这个Western 的目的条带为什么出现了两条带？
亲们，我这个Western 的目的条带为什么出现了两条带？左边的样是过表达的，上面的不太像是一条带，大家出现过这种情况吗？刚刚没有上传图片，不好意思
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作者:
微笑流滢
时间:
2013-9-18 18:08
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微笑流滢
的帖子
" Z& v1 j9 C! n7 Y4 ^) q
6 e/ B4 o8 s0 n& e! c' ^" O
上面的图和下面的图其实是一样的，只是曝光时间不一样。过表达的两条带原本是分开的，曝光时间长了，就连在一起了，也就是下面那个图的样子
作者:
aulenuyah
时间:
2013-9-19 18:45
抗体说明书中的条带是几条呀？
作者:
yueweilei
时间:
2013-9-19 21:08
右边是什么样品啊？！
作者:
helong
时间:
2013-9-20 09:50
自问自答，不错
作者:
initiation
时间:
2013-9-20 15:58
你好！从你的图中来看，左边的的确有2条带，我觉得上边的带肯定是条带，因为你的曝光太强了，如果曝光再弱一些，它就是一条细细的带了，上边的带应该是你的目的蛋白，因为第一过表达蛋白一般会比较强，第二右边的样品里没有上侧条带，下面的带可能是杂带。
作者:
lmchen
时间:
2013-9-22 09:56
你过表达的蛋白带tag吗？如果有tag的话，两条带都是你的目的蛋白，上面的是过表达的，下面的是原本细胞内含有的。
作者:
微笑流滢
时间:
2013-9-22 11:04
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initiation
的帖子
! p! p. a) j2 n8 l* P
9 R0 ?, a" F* w0 S+ f
右边是对照，那条细的条带是这个蛋白应该所在的位置，所以现在是搞不清楚为什么过表达的（就是左边）上面多了一条带？而且和对照的不在一个地方？？？？
作者:
微笑流滢
时间:
2013-9-22 11:07
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lmchen
的帖子
: I- B9 u7 b( w1 X% i2 X/ O
! u1 R0 f) u5 C" K) N4 l
这个没有标签，我们一开始也觉得是下面的是本底表达，上面的是过表达的，可是他们的分子量差的有点远，是不是有修饰什么的？？？
作者:
微笑流滢
时间:
2013-9-22 11:07
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lmchen
的帖子
$ z6 }6 u4 i! F$ d Y+ t7 T
) B2 _+ z W1 o7 C# ?) ~! H$ {( h
这个没有标签，我们一开始也觉得是下面的是本底表达，上面的是过表达的，可是他们的分子量差的有点远，是不是有修饰什么的？？？
作者:
微笑流滢
时间:
2013-9-22 11:07
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lmchen
的帖子
. u( u8 t# s3 \3 g9 [
4 o1 C d; b, j7 m0 i" h! j$ f: _
这个没有标签，我们一开始也觉得是下面的是本底表达，上面的是过表达的，可是他们的分子量差的有点远，是不是有修饰什么的？？？
作者:
微笑流滢
时间:
2013-9-22 11:07
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helong
的帖子
. I0 g/ D% ~' w
! h; L5 A/ s8 m, g5 p9 }, j% a1 j& h
是没有解释清楚
作者:
微笑流滢
时间:
2013-9-22 11:08
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yueweilei
的帖子
) _$ G; x0 }" H5 s1 R
' d" A' T1 D4 {- T$ W
是对照，没有转染过表达质粒，只是转染了一个普通的质粒
作者:
微笑流滢
时间:
2013-9-22 11:12
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aulenuyah
的帖子
- _$ u4 M% x7 w, h2 W
; d P2 S7 W3 g( z2 q
在37 KD左右只有一条带，有的裂解物里有几条，不过都离得很远，而我这个两条带离得还可以，不像抗体说明书里那么远
作者:
yaner
时间:
2013-9-22 16:05
下面的应该是杂带，抗体加大稀释度或者重复利用的话，下面的带就会消失了
作者:
微笑流滢
时间:
2013-9-22 19:15
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yaner
的帖子
+ h. J& i7 @6 \9 N9 d
; O6 B) A- p6 m& f
右边是对照，那条细的条带是这个蛋白应该所在的位置，所以现在是搞不清楚为什么过表达的（就是左边）上面多了一条带？而且和对照的不在一个地方？？？？
作者:
微笑流滢
时间:
2013-9-22 19:16
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yaner
的帖子
+ _% |8 b5 w" R/ {% z) e
% N$ q( j6 I9 X- b j! ?
一个师姐说，可能有一些什么糖基化修饰啊，什么的，所以可能导致其不在一个地方
作者:
castlered
时间:
2013-9-25 14:21
非特异吧
作者:
sc-cxw
时间:
2013-9-26 16:29
两条带的离的很近的情况下 通常是蛋白发生了磷酸化或者乙酰化或者氧化之类的修饰，用软件预测一下是否有翻译后修饰位点。
作者:
cronos0910
时间:
2013-9-28 01:43
Maybe that are isoform of your protein.
作者:
yueweilei
时间:
2013-9-28 21:01
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微笑流滢
的帖子
0 i( t. M( w. ]* O* H" d I- k
) K/ f" Q) R/ K [ Y$ `5 v( S9 k
右边是空白对照的话，那下面的那条带就是non-specific 条带，上面那条带就是目的蛋白条带。
作者:
moonison
时间:
2013-10-2 23:51
呵呵，条带的距离和分子量虽然有关系但并不是线性的，和修饰什么的都有关系的，加个TAG就很可能跑出来这种情况的，如果你实在不放心可以再加一个不加TAG的过量表达的对照就清楚了。
作者:
微笑流滢
时间:
2013-11-13 16:44
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moonison
的帖子
: z8 {. h+ Y2 z6 N" V
4 ]1 ?9 M( g1 o6 p* S9 E( r/ `
额，我这个没有Tag
作者:
zhucexiaji
时间:
2014-2-24 16:17
2条带，你是用的多抗还是单抗呢？抗体特异性会造成多条带，而且看你的图曝光时间过久，而且抗体浓度用的太高了，建议先测一测抗体效价，减少曝光时间，以及摸索下合适的抗体浓度
作者:
石山巨石
时间:
2014-4-2 11:43
这上面那条 是由于东西多了 上下两条带目测比例大概是 100：1 下面那条带 我到时觉得 和对照 还是有一点细微差异的 多跑跑看看 有没有区别
作者:
石山巨石
时间:
2014-4-2 11:43
这上面那条 是由于东西多了 上下两条带目测比例大概是 100：1 下面那条带 我到时觉得 和对照 还是有一点细微差异的 多跑跑看看 有没有区别
作者:
碧螺春的秋天
时间:
2014-5-2 10:37
非特异性，转入蛋白所带标签，翻译后修饰都有可能，不过看上去对照和实验的下侧条带一样，上面的过表达蛋白较大，有可能是过表达载体上有其他东西表达了，建议检查下载体元件
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