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标题: 293T细胞污染问题 [打印本页]

作者: 小咪咪 时间: 2013-10-5 17:20 标题: 293T细胞污染问题

养293T的时候发现液面上漂了一层一团一团的细胞，怎么洗也洗不掉，我想请问一下有谁知道是什么污染啊？原图附上7 R0 `+ t* ]( l# I+ `0 y7 T1 b

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作者: 孤野知—少帅 时间: 2013-10-5 19:24

你消化了多长时间，一般293T用胰酶消化一分钟就可以了，吹打一下应该不会有团块细胞出现的。! W% Y; r1 F/ @7 ?, y$ A$ {
不过看你的图应该是污染了

作者: 小咪咪 时间: 2013-10-5 22:06

回复孤野知—少帅的帖子
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不是消化，是培养的时候不知从哪里长出来的。由于293T贴壁不牢，我一般直接吹打，很少用胰酶消化的。这个我估计就是污染，但具体是什么污染还没有确定。

作者: 孤野知—少帅 时间: 2013-10-5 22:27

回复小咪咪的帖子
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为什么一定要查出它是什么污染呢，操作不慎很有可能导致一些不确定的污染，你可以再按严格操作做一皿试试看

作者: xuyang0317 时间: 2013-10-5 22:34

是什么导致的污染应该很难查到的，细胞分离操作每一步都得小心，每一步的操作不慎都可能导致污染，良好的操作流程是必要的，你再分离一次，每一步要细心，每一步要小心，尽量靠近酒精灯操作，每次在外面拿了东西都有给自己的双手消毒，操作工具要过火。。。。你都得注意！

作者: 小咪咪 时间: 2013-10-6 08:57

回复孤野知—少帅的帖子0 \+ k! D ]( P0 J6 T4 ~0 t% O( F. H- g
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因为那瓶细胞是我们刚买的，一养就出现这样的问题，必须了解清楚。对于你提出的问题，我们已经通过对比实验排除了。要找出原因是因为这种污染正向其他的细胞蔓延，我怕污染都别的细胞，现在都丢弃了，但必须给别人公司一个说法。so...

作者: 小咪咪 时间: 2013-10-6 08:59

回复 xuyang0317 的帖子, _( A Z6 p: x

谢谢您的答复，但我可以肯定不是基本操作的问题。

作者: 元芳 时间: 2013-10-6 15:30

1640+FBS?/ [7 a& N8 O; l3 d4 m' H( `
你确定没有用错培养液吗？
我记得经典培养液都是DMEM+FBS。1640通常养悬浮细胞。9 j: n, I) g/ P" |5 H$ W* J0 g. D
你的细胞不像污染，但是状态不好。漂浮物应该是死细胞团。

作者: 小咪咪 时间: 2013-10-6 16:54

回复元芳的帖子

那个是买回来的时候瓶子上写的，应该是他们的培养基，我后来是用DMEM的。一开始我也怀疑是死细胞团，但后来换液的时候用PBS缓冲液怎么洗都洗不掉，跟它放一起的细胞也开始出现这种情况，所以我才确定这个是污染的。

作者: friendly0722 时间: 2013-11-11 16:24

像霉菌

作者: huangcong1988 时间: 2013-11-11 20:19

回复元芳的帖子

可以确定的是，293T用1640养一点问题都木有

作者: cyberpig 时间: 2013-11-17 14:08

會不會是買回來的時候已經污染了？
這些棕色的東西我也覺得是fungi，如果你一定要那些細胞，不如你試一下加一些fungazone吧。有污染的話基本上最好也不要留了，不然可能污染整個塔養箱的。

作者: zm19900508 时间: 2013-11-18 13:10

应该是霉菌污染，我前段时间养的plate E皿上长了好多克隆状的细胞团，刚开始以为是没消化完全，重新消化分盘后还是那样，没想到是污染就直接扔了，结果师兄养的plate E几天后出现了同样的情况，才意识到问题的严重性。我们把用到的试剂全扔了，培养箱彻底消毒，养一段plate E等稳定后才敢做实验。

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