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标题: 免疫荧光假阳性的问题，高手赐教 [打印本页]

作者: 第一心音 时间: 2013-10-11 15:07 标题: 免疫荧光假阳性的问题，高手赐教

本人做干细胞分化实验，分化之后检测VASA标记，开始做的时候发现细胞阳性率很高，我就用阴性对照组，用成纤维细胞做，因为这个细胞确定不表达vasa，结果，所有细胞都发荧光，说明一下，我的一抗是新买的，abcam的，一抗是兔抗人，二抗是山羊抗兔，波段488，发绿色荧光。不加一抗时候很少细胞发光，求高手赐教

作者: sun_happone 时间: 2013-10-15 09:01

要确定是否是假阳性，还有一个方法，就是换个荧光通道看看，比如阳性如果发绿光，你可以在红光下看看，如果红光下还是有阳性细胞，那你在绿光视野下看到的阳性率就是假阳性。另外你的阴性细胞也发光，是不是你的封闭做的不好啊，造成非特异位点也标上了红光，或者洗一抗或二抗的时候没有洗干净而导致的，就是操作问题，下次注意点应该没什么太大问题的。

作者: zhucexiaji 时间: 2014-2-24 16:34

非常赞同楼上的观点，你首先应该确认你的实验试剂及实验步骤等细节是否有问题，因为封闭及洗脱的效率会严重影响你的实验结果，其次就是你的一抗了，你可以做个western验证下，你的抗体是否是特异性的，

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