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标题: 求助最近培养的人hESC特别容易分化，通常第3天就分化了 [打印本页]

作者: 青鸟 时间: 2013-10-17 08:59 标题: 求助最近培养的人hESC特别容易分化，通常第3天就分化了

本帖最后由细胞海洋于 2013-10-17 11:08 编辑 * |# ?% F3 J# E

各位大神们，最近培养的人hESC特别容易分化，通常第3天就分化了，求教！

作者: waterbubble 时间: 2013-10-17 09:03

是不是你这批冻存细胞时候状态就不好啊

作者: waterbubble 时间: 2013-10-17 09:05

要是分化细胞不多，可以传代时先消化一下分化的细胞容易掉下来吸走，再消化hESC。这样传两代，就会好了。要不然你实验室有条件的话就刮掉那些分化的细胞。

作者: waterbubble 时间: 2013-10-17 09:06

不知道对不对，请各位大神批评指正

作者: SKC-SFC 时间: 2013-10-17 11:16

细胞分化应该跟培养条件不合适有关系或者细胞传代前状态就不好

作者: watchen198891 时间: 2013-10-17 13:25

要不你试一试手工传代

作者: wwy551 时间: 2013-10-17 13:28

很可能是你用的MEF feeder不好，可以考虑重做原代MEF，传代不超过三代做feeder。
提高现在培养ES用的培养液中的bFGF浓度，如果分化状况不是特别严重，传代ES之前在显微镜底下标记出来分化的克隆，挂掉。如果分化得很严重了，建议重新找来状态好的ES培养，一定要把MEF搞好。

作者: zxmflying 时间: 2013-10-17 16:26

是不是培养基有问题？

作者: 青鸟 时间: 2013-10-17 21:20

我们现在用的就是三代以内的MEF，一直都是机械传代，没有用过酶传代。请教你们传代时挑选克隆的经验？

作者: gzeb 时间: 2013-10-18 09:29

细胞出现分化跟传代是否手工或机械没什么关系，主要是生长环境问题，你是最近几次培养出现过度分化吗？如果以前都没问题，而且你最近使用过的试剂、因子有所变动，就想想是否是这方面的问题，特别是血清和细胞因子

作者: 细胞海洋 时间: 2013-10-18 10:35

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作者: 细胞海洋 时间: 2013-10-18 10:36

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看9楼

作者: nichifanlema2 时间: 2013-10-18 11:07

回复青鸟的帖子9 F: v, ~7 b7 F8 t8 H8 I' z

如果能提供图片更好解答一些。我觉得很可能是feeder密度的问题。

作者: 青鸟 时间: 2013-10-18 17:14

回复 waterbubble 的帖子

我们一直是机械传代，求你们传代时细胞选择的经验

作者: 青鸟 时间: 2013-10-18 17:15

回复 gzeb 的帖子

我们的试剂一直很稳定，没有随意更改过，同求你们细胞选择的经验

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