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标题: 求助最近培养的人hESC特别容易分化,通常第3天就分化了 [打印本页]

作者: 青鸟    时间: 2013-10-17 08:59     标题: 求助最近培养的人hESC特别容易分化,通常第3天就分化了

本帖最后由 细胞海洋 于 2013-10-17 11:08 编辑 . J  h' j6 y6 d: N+ U3 j9 J
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各位大神们,最近培养的人hESC特别容易分化,通常第3天就分化了,求教!% J& T1 j$ }( u  M& K

作者: waterbubble    时间: 2013-10-17 09:03

是不是你这批冻存细胞时候状态就不好啊
作者: waterbubble    时间: 2013-10-17 09:05

要是分化细胞不多,可以传代时先消化一下分化的细胞容易掉下来吸走,再消化hESC。这样传两代,就会好了。要不然你实验室有条件的话就刮掉那些分化的细胞。
作者: waterbubble    时间: 2013-10-17 09:06

不知道对不对,请各位大神批评指正
作者: SKC-SFC    时间: 2013-10-17 11:16

细胞分化应该跟培养条件不合适有关系或者细胞传代前状态就不好
作者: watchen198891    时间: 2013-10-17 13:25

要不你试一试手工传代
作者: wwy551    时间: 2013-10-17 13:28

很可能是你用的MEF feeder不好,可以考虑重做原代MEF,传代不超过三代做feeder。2 T; E" o# [8 r, F4 a
提高现在培养ES用的培养液中的bFGF浓度,如果分化状况不是特别严重,传代ES之前在显微镜底下标记出来分化的克隆,挂掉。如果分化得很严重了,建议重新找来状态好的ES培养,一定要把MEF搞好。
作者: zxmflying    时间: 2013-10-17 16:26

是不是培养基有问题?
作者: 青鸟    时间: 2013-10-17 21:20

我们现在用的就是三代以内的MEF,一直都是机械传代,没有用过酶传代。请教你们传代时挑选克隆的经验?
作者: gzeb    时间: 2013-10-18 09:29

细胞出现分化跟传代是否手工或机械没什么关系,主要是生长环境问题,你是最近几次培养出现过度分化吗?如果以前都没问题,而且你最近使用过的试剂、因子有所变动,就想想是否是这方面的问题,特别是血清和细胞因子
作者: 细胞海洋    时间: 2013-10-18 10:35

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作者: 细胞海洋    时间: 2013-10-18 10:36

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看9楼
作者: nichifanlema2    时间: 2013-10-18 11:07

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0 X' D7 L' r9 y9 I- Z/ A- K" @, Q; H7 ~5 H/ x2 y
如果能提供图片更好解答一些。我觉得很可能是feeder密度的问题。
作者: 青鸟    时间: 2013-10-18 17:14

回复 waterbubble 的帖子! _- d0 }  y9 t: U( U/ H4 O! q& x# H
# }8 M1 i4 ~% ~8 @( ?
我们一直是机械传代,求你们传代时细胞选择的经验
作者: 青鸟    时间: 2013-10-18 17:15

回复 gzeb 的帖子& X2 _4 x8 X9 @8 `: K  p9 h: a

9 k! F; J" y+ U* t( z我们的试剂一直很稳定,没有随意更改过,同求你们细胞选择的经验




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