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标题: 脐血干细胞、脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞和CIK细胞冻存密度 [打印本页]

作者: tianangelt 时间: 2013-11-16 09:54 标题: 脐血干细胞、脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞和CIK细胞冻存密度

大家好，最近在冻存以上四种细胞，但冻存效果不好。请问大家在冻存以上四种细胞的时候，冻存密度分别是多少呢？谢谢。

作者: tianangelt 时间: 2013-11-16 09:56

我冻存以上细胞都是用的Medium：FBS：DMSO=5:4:1的冻存液，另外都是人源细胞，希望大家不吝赐教

作者: yaolinzhang 时间: 2013-11-16 13:52

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DMEM：FBS：DMSO=7:2:1，细胞密度可以为105-106/管

作者: wf78365421 时间: 2013-11-16 15:51

细胞密度可以为105-107/管

作者: tianangelt 时间: 2013-11-16 17:03

回复 wf78365421 的帖子2 F9 `, S8 ]1 L. D6 a+ q$ v0 V

如果达到1*10^8/ml是不是就太高了？

作者: apsuifeng 时间: 2013-11-16 18:35

回复 yaolinzhang 的帖子

FBS比例多会影响冻存效果吗？？ FBS在冻存这些细胞时不是提供养分的吗？？

作者: 2420527 时间: 2013-11-16 20:30

主要还是看你的冻存液怎么样吧，一般10%DMSO+培养基，浓度105-107/管应该都可以的。

作者: tianangelt 时间: 2013-11-17 10:33

回复 yaolinzhang 的帖子

这个密度会不会太低了？复苏的时候本来就会丢失一部分细胞，这个密度如果复苏在T75培养瓶的话，需要很多支合并在一起吧？请问您用这个密度冻存的是MNC细胞吗？

作者: tianangelt 时间: 2013-11-17 10:35

回复 apsuifeng 的帖子" C! {$ E/ B6 N! U

个人感觉应该不会，很多人用的是FBS：DMSO=9:1的冻存液，只是不知道密度太高是不是会影响冻存效果。

作者: tianangelt 时间: 2013-11-17 10:37

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那您有没有试过比较高的浓度呢？如果达到10^8/ml可以吗？我怎么看有的人说MNC冻存要达到2*10^8呢，没有查到相关的文献报道。

作者: yangpan521 时间: 2013-11-17 11:02

DMEM：FBS：DMSO=5:4:1 以2X107-1X108冻存MSC，DMEM：HSA：DMSO=5:4:1 以2X107-1X108冻存淋巴细胞，

作者: tianangelt 时间: 2013-11-17 11:07

回复 yangpan521 的帖子
6 g" q) t5 c' `& f! ?
冻存淋巴细胞必须用HSA吗？可以用human plasma代替吗？

作者: yangpan521 时间: 2013-11-17 15:55

回复 tianangelt 的帖子# F6 u* P: o* R, m4 }' T4 c

没有用过自体血浆的，血浆要处理

作者: tianangelt 时间: 2013-11-17 16:22

回复 yangpan521 的帖子 X, h" K& {0 d/ i( r7 c0 o' A
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我们的血浆灭活30min，但冻存效果不好，而且会损失很多细胞。请问您做淋巴细胞冻存时，复苏后细胞活力能达到多少？死细胞和损失的细胞多吗？谢谢。

作者: 2420527 时间: 2013-11-17 19:11

回复 tianangelt 的帖子- h+ y2 B5 L M5 }6 `- k# V$ K
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10^8没有试过，一般冻存1ml，10^8细胞的话，可能会成团

作者: 2420527 时间: 2013-11-17 19:11

回复 tianangelt 的帖子, n C% R/ V0 x: ~" C4 d# W# V4 K
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10^8没有试过，一般冻存1ml，10^8细胞的话，可能会成团

作者: deshenglll 时间: 2013-11-18 08:53

回复 tianangelt 的帖子" \2 w2 }7 Y a% K

FBS是不是太高了？细胞密度太高了。一般在2*106-5*107左右吧。细胞密度太高了不好。

作者: yaolinzhang 时间: 2013-11-18 09:19

回复 tianangelt 的帖子

可以接种在6cm 或10cm皿中，是MSC

作者: tianangelt 时间: 2013-11-18 10:31

回复 2420527 的帖子6 {+ S$ J- u! m

细胞是会成团，一般MSC冻存密度比较低，MNC有时会达到10^8，以后试一下降低密度看看。

作者: tianangelt 时间: 2013-11-18 10:31

回复 deshenglll 的帖子

多谢，FBS高了会有不好的影响吗？

作者: tianangelt 时间: 2013-11-18 10:32

回复 yaolinzhang 的帖子1 T1 N& p/ f2 G' i
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您复苏后细胞长的状态怎么样呢，细胞损失多吗？

作者: 沙漠狐o0 时间: 2013-11-18 11:37

CIK的话，5*10^7没有问题，MSC一般10^6或者10^7.

作者: tianangelt 时间: 2013-11-18 11:42

回复沙漠狐o0 的帖子! ~& C0 Z2 ^) S/ E" Y

那请问你一般在第几天冻存CIK呢？是用的普通的冻存液吗？复苏后细胞活率和细胞得率怎么样呢？谢谢

作者: 沙漠狐o0 时间: 2013-11-19 10:09

回复 tianangelt 的帖子1 N0 I x+ [5 v" l# A- \
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一般是在14天左右啦，就是普通的冻存液，培养基：FBS：DMSO=7：2：1。复苏细胞活率85%以上，得率看你的离心机及设置，细胞肯定会有不少损失的。

作者: tianangelt 时间: 2013-11-19 10:27

回复沙漠狐o0 的帖子
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嗯，多谢，我们试着用培养基：FBS：DMSO=5：4：1，复苏后细胞大片粘附在一起，也会损失不少。请问你们复苏后培养基里面加CD3 Ab吗？复苏后几天回输？

作者: deshenglll 时间: 2013-11-19 11:12

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一般不都用10%的浓度么。好像高了细胞容易分化。我们用的都是成品培养基。

作者: tianangelt 时间: 2013-11-19 11:35

回复 deshenglll 的帖子. R/ A# h' S" N& J/ R4 ?8 @% a+ b9 a, c

冻存的过程中，细胞不是出于休眠状态吗，也会出现分化吗？

作者: deshenglll 时间: 2013-11-20 10:48

回复 tianangelt 的帖子

培养过程。好像别人用的培养基FBS都是10%的吧。

作者: tianangelt 时间: 2013-11-20 15:27

回复 deshenglll 的帖子
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哦，我以为您说的是冻存过程的FBS比例，谢谢。

作者: cantonchn 时间: 2013-11-20 15:56

msc5*10^6是合适的

作者: chinabiohao 时间: 2013-11-21 15:17

干细胞最好还是用干细胞专用的冻存液。普通的DMSO冻存影响细胞活性。现在市面上有好多干细胞专用的冻存液。

作者: tianangelt 时间: 2013-11-21 15:48

回复 chinabiohao 的帖子" D& o6 b/ W# B

请问您有用过比较好的推荐的冻存液吗，谢谢。

作者: wf78365421 时间: 2013-11-23 15:53

回复 tianangelt 的帖子1 a: V9 u9 ]2 q: }. ^! Q" m7 D
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不高。可以的。我做过的。

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