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标题: NSC原代培养及传代相关问题~~~~~求教 [打印本页]

作者: ss安雅熙 时间: 2013-11-19 17:20 标题: NSC原代培养及传代相关问题~~~~~求教

最近在做新生24h海马神经干细胞的培养遇到如下问题，希望有高手解决！
原代：1、关于取材部位：是取海马还是皮层的干细胞好培养呢？9 Y9 D; b; i2 f
         2、原代消化：我现在用0.125%EDTA-胰酶消化15分钟，效果不错。有人建议光用胰酶消化，请问两者哪个更好些？' z. f( G8 V" v/ t+ {
         3、终止培养：我用10%FBS终止但是还有离心洗一下，对细胞有损伤，有没有更好的办法？有人说用NSC全培终止可以么？原理是什么？
      4、培养密度：我3*105/ML接种到小培养瓶（底面积25）子里神经球长的不是太多，但是提高密度成球太快而且都聚集一起，请问大多密度接种较为合适？0 M; c1 Q$ m% a" ~0 b
传代' N1 I+ d( m& a" A9 {
      1、我差不多4、5天传代。看帖子说有的就机械吹打，可是我的干细胞怎么吹都吹不散，后来改用0.125%EDTA-胰酶消化15分钟才可以成单细胞，前提是还必须用PBS洗2遍。这样操作传代的损失很多细胞，我有的时候7、8小瓶才能传一个6孔板，忘告诉告诉小妹一声，怎么传代为好，感激不尽啊~~~~~~~, t# W" J' U8 k' x7 z5 h  [) {4 m
后续还要做神经干细胞诱导分化还要好多问题望有人一起讨论

作者: yaolinzhang 时间: 2013-11-20 17:28

回复 ss安雅熙的帖子
2 M/ o* p. O/ }0 P5 n. N
问题有点多，尝试一下：
1.个人认为海马的比较好，细胞多，再生能力强；) c( z& ]- R! u$ |
2.按你自己的做，出现问题再做trobleshooting；" q. h2 t5 \( ~ L3 d
3.终止就行；
4.试试6×105；
5.建议用你自己的胰酶消化法，至于PBS冲洗，一般都会损失细胞，不行你可以只洗一遍试试。

作者: ss安雅熙 时间: 2013-11-25 11:42

有没有高手可以回复一下

作者: enderao 时间: 2013-11-25 11:58

你好，我是准备养神经干细胞，不过刚刚开始作动物模型，还没有提取神经干细胞，很多人说用脊髓的神经干细胞比较容易，你感觉呢，以后有什么心得咱们都可以交流下

作者: 细胞海洋 时间: 2013-11-26 09:11

回复 enderao 的帖子

你回复谁就点击对方回复帖子中的回复按钮然后输入内容像我这样 i7 F D5 V$ c/ H7 R# {

否则他会看不到

作者: 碧落 时间: 2014-1-2 10:51

用GBICO的accutase消化比较温和

作者: pengxuleo 时间: 2014-1-2 13:13

回复 ss安雅熙的帖子- Z8 N+ J# u! [
0 \" b/ n- _7 A$ t' i! ?9 v
关于神经干细胞的传代，不需要消化成单个细胞，只要将神经球分散能小的神经球就可以了，这样细胞长的会好些。像你说的7、8瓶传一个6孔板，说明你细胞还是太少了，也许你传代传早了。

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