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标题:
免疫组化DAB显色太快，10秒不到就片子就黄了
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作者:
请叫我晓白
时间:
2013-11-23 14:40
标题:
免疫组化DAB显色太快，10秒不到就片子就黄了
本帖最后由 请叫我晓白 于 2013-11-23 14:41 编辑
) a# N. X6 j* t. M h
1 H' a' Q) }" L! N1 A
各位请指教一下啊
3 Y- L4 U5 A- S; J: v2 \4 m3 R1 Z8 P8 I
急啊 做了好几次都做不出来
% P+ n: [( n. g# O
我做的心脏组织的免疫组化，用的是博士德公司的SABC试剂盒
S+ u; H: B9 U: ~6 c2 y$ q
大概步骤如下：
! }4 \& F3 s i6 U
脱蜡至水，微波修复中高火5min沸腾后断电保温5min，冷却后3%双氧水避光20min
8 u$ k8 R7 O# p- ~ H- R9 y
一抗1:50 1:100 1:200四度过夜，加biotin羊抗兔二抗37度20min，后加SABC37度20min
5 q2 c# H) B% R2 x/ d
DAB配制：滴加A液（DAB）、B液（H2O2）、C液（TBS），然后加1ml蒸馏水
' l v, q( R6 w7 s& p) D* V/ }
滴加DAB显色，自来水冲洗15min，然后苏木素复燃1min，自来水冲洗15min反蓝，盐酸酒精分化10秒
9 |& e/ c# V5 \3 e1 ?
脱水透明。
3 f0 J$ \& h4 T3 u9 U( `+ r
结果很不理想啊
$ H; B0 X7 U+ U! n1 @
我滴加DAB显色10秒片子就泛黄了，根本来不及镜下观察，赶紧涮干净拿去自来水冲了。可是镜下一看片子都很黄
- r! x) ?% a, _) `. d. P
而阳性的感觉不明显。
# p: v a6 J" S, s* M* F/ }. y
请问这是什么原因啊？是我的DAB配制有问题吗？A、B、C液和蒸馏水应该按什么顺序加啊？
' x. {4 Y* E6 I# B4 A6 C
另外DAB显色快是否可以降低一下DAB浓度呢？
7 {' Q# t6 i+ \5 I- N
万分感谢
2 {# g& D/ w/ c+ D1 T" W ^: T
作者:
flagarmy
时间:
2013-11-24 10:32
a+b+c 避光没？
: w6 I3 O; P/ D, }, @9 P; N0 _6 ^! D& w
作者:
flagarmy
时间:
2013-11-24 10:32
a+b+c 避光没？
/ H4 s7 L" r& Z" N/ l
作者:
请叫我晓白
时间:
2013-11-24 17:48
flagarmy 发表于 2013-11-24 10:32
- E) k p7 W5 v3 |/ k
a+b+c 避光没？
M6 N2 |0 z" B3 t/ a
我都是要用之前配制，配好就用。应该不存在没避光的原因吧
: m$ B: B& |& k
作者:
runsong
时间:
2013-11-24 20:48
一抗太高了
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