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标题: 不同大肠杆菌感受态的区别 [打印本页]

作者: zm19900508 时间: 2013-11-30 13:01 标题: 不同大肠杆菌感受态的区别

TOP10， DH5a, StbI3 这三种感受态的区别是什么？分别适用于什么情况呢？各位走过路过的童鞋们帮帮忙解答一下啊

作者: 老十 时间: 2013-12-2 20:32

DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
; |) r: X( U2 _% v* a
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1
TOP10菌株
* S$ n) q I- K
该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)， φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74， recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697， galU ，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG3 e! b. s( D' i1 x% m$ R' \
可以看看别人博客里写的+ D) P$ U( v( ~5 ?- |/ Q
http://bbs.sciencenet.cn/blog-444413-417709.html

作者: weiyepan 时间: 2013-12-3 09:09

DH5a转化效率最高，适用于常规克隆。
TOP10转化效率低很多，不怎么好用。
Stbl3主要用于比较大的质粒，提高其稳定性。

作者: 石山巨石 时间: 2013-12-4 08:19

稳定性 stbl3 大于top10大于 DH5a. K) C# @! Y% @$ M
效率是反过来的

作者: 石山巨石 时间: 2013-12-4 08:33

回复老十的帖子! l* o4 P; b) r1 N' h; p! q" k* O, \

请教一下是所有的pUC系列都可以做蓝白筛选么还是只有pUC19可以？

作者: zm19900508 时间: 2013-12-4 08:40

回复老十的帖子

多谢哈

作者: zm19900508 时间: 2013-12-4 08:40

回复石山巨石的帖子6 V# ]2 {- y. h% j A/ c- K
u H+ J/ Q5 m, m; a
谢啦

作者: zm19900508 时间: 2013-12-4 08:42

回复 weiyepan 的帖子
- \/ r$ n0 w& o U
我们实验室一般用的是TOP10，慢病毒载体用StbI3,最近在做一批shRNA,菌批一直没有阳性

作者: wf78365421 时间: 2013-12-4 13:15

DH5a是大肠杆菌的一种菌株。DH5a的感受态是指细胞经过一些特殊方法（电击法、CaCl2法等处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的细胞，即感受态细胞(Compenent cells)。
DH5a转化效率最高，适用于常规克隆。3 U* p" E, T9 G: P& k' G( h
使用建议DH5a

作者: weiyepan 时间: 2013-12-4 14:04

回复 zm19900508 的帖子, |3 ^# f7 G6 P! @$ W

shRNA估计也是病毒的载体吧？用Stbl3吧。你是做克隆么？引物退火连接？然后转化没有阳性是么？

作者: zm19900508 时间: 2013-12-4 16:15

回复 weiyepan 的帖子7 [; J. v: y1 S' r# X3 w9 y
" m# E& J p" P) D4 |) }
嗯，用的慢病毒载体--PLKO，用StbI3转化时不长，用TOP10长了好多，但没有阳性。

作者: zm19900508 时间: 2013-12-4 16:18

回复 wf78365421 的帖子

师兄说慢病毒载体最好不要用DH5a,很容易发生重组

作者: 老十 时间: 2013-12-4 17:15

回复石山巨石的帖子
7 x( d" C8 z! X* {8 {1 E' U# F _! U& C
只要lacZ没被破坏就行。一定要看plasmid 的图谱，puc plasmid 是被改造的很多，是否会留lacZ 不一定。

作者: 老十 时间: 2013-12-4 17:16

回复石山巨石的帖子

只要lacZ没被破坏就行。一定要看plasmid 的图谱，puc plasmid 是被改造的很多，是否会留lacZ 不一定。

作者: 老十 时间: 2013-12-4 17:59

回复石山巨石的帖子5 n/ S( R- \$ G* G9 Z+ L

只要lacZ没被破坏就行。一定要看plasmid 的图谱，puc plasmid 是被改造的很多，是否会留lacZ 不一定。

作者: 老十 时间: 2013-12-4 18:38

晕，点了三下就回了三次，谁能帮忙删了多余的吧。

作者: weiyepan 时间: 2013-12-5 08:09

回复 zm19900508 的帖子- U! O3 F4 t# z& X+ m

Stbl3的效率大概是DH5a的1/10，做得好的话。换一批Stbl3吧，得有10^8cfu/ug以上才好做。) [+ o7 g2 z% g) \
要不然就是你引物没处理好，最好做个PNK再连接。

作者: zm19900508 时间: 2013-12-5 08:38

回复老十的帖子

哈哈，找细胞海洋？

作者: zm19900508 时间: 2013-12-5 08:39

回复 weiyepan 的帖子

什么是PNK再连接，为什么要做PNK再连接？呵呵，麻烦啦

作者: weiyepan 时间: 2013-12-5 13:17

PNK 就是 Polynucleotide Kinase，让你先加磷酸基到引物5'端再做连接的意思。我们的确有试过做shRNA连接不做PNK转化不长的现象，尤其是引物质量不好的时候。

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