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标题:
脐带干细胞活性
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作者:
Amanda121201
时间:
2013-12-5 09:35
标题:
脐带干细胞活性
现在报道的分离脐带干细胞的技术有很多，虽然都大同小异，但是我想跟大家探讨下，怎样才能提高分离培养出来的脐带干细胞的活性呢 有的时候分离可能会带入部分上皮细胞 又该如何避免呢，求指教
作者:
deshenglll
时间:
2013-12-5 15:18
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Amanda121201
的帖子
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这主要看个人的分离手法了。技术熟练的会少或没有。不过有些杂细胞也无所谓的。杂细胞大多贴壁比较牢，难消化下来。我们用于临床的细胞一般在2-4代，所以大多不用为这方面担心。
作者:
18943340581
时间:
2013-12-6 13:46
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Amanda121201
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" E& y& w8 R+ y p
首先，脐带的运输温度要尽量保持在4℃左右，运输时间不能超过36h。
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其次，收获细胞时使用的胰酶浓度不能太高，我们是用0.05%的。
# m+ o5 c" M: d U6 t
最后，去除杂细胞可以通过传代的方式，一般到第3代的时候就很存了。
作者:
荷荷
时间:
2013-12-7 11:38
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Amanda121201
的帖子
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要提高分离的细胞的活性，我感觉有以下几个影响因素：
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1 操作者的分离熟练程度；
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2 尽量缩短脐带在外面放置的时间；
" E. P6 f& W6 Z# e- \ h q* A
3 手术器械要用起来比较顺手，剪刀要尽可能的锋利；
3 Z) P/ ]: `3 X2 D2 X/ {
4 注意细胞的传代时间，70-80%的时候最好开始传；传代时尽量避免离心；
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5 胰酶的使用浓度，在可能的情况下降低胰酶的使用浓度
0 a1 U0 |. I7 U0 ]
杂细胞的出现与操作者的熟练程度和使用的培养液有关，一般可通过传代的方法纯化，不过在分离过程中剥离干净羊膜、静脉和动脉，对避免杂细胞的出现更为重要。
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作者:
menghy
时间:
2013-12-8 15:39
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Amanda121201
的帖子
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$ f# g) P; ~8 W! U% f# j, x
首先看你采用的分离细胞的方法，贴壁法和酶消化法得率细胞都不一致。在分离过程中，要完全的弃除两条动脉，静脉内皮也要全部弃除，不然在培养过程会出现内皮细胞。活性的话可以通过勤观察，勤换液，当细胞达到80%时即可传代，不然细胞生产密度过大，对后期细胞传代的代次有影响。
作者:
Amanda121201
时间:
2013-12-9 10:39
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menghy
的帖子
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3 ~. S' `+ N9 D6 q2 w3 n1 i
恩 现在细胞刚有爬出来 不过还是很少 我们实验室常用的方法就是贴壁法 分离脐带 真是很辛苦的说 我会继续观察和学习的 以后还请多多指教
作者:
Amanda121201
时间:
2013-12-9 10:41
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荷荷
的帖子
# t W. G3 D% ^
' x$ a2 S2 c( t! v% j
谢谢回复 很受用 不过因为某些原因 这次脐带拿到之后 没有及时分离 大概过了三五天的样子放在4度冰箱里 不知道会不会也会影响之后细胞的活性 不过好在 现在已经有细胞爬出来了 不过数量很少 我会继续观察的 多谢指导
作者:
Amanda121201
时间:
2013-12-9 10:42
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18943340581
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6 H1 }( A) o+ ?+ W/ K
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恩 我用的是贴壁法 现在细胞刚爬出来 数量还是比较少的 需要后期的观察了 实验室用的是商品化的胰酶 大概是2.5%的吧 所以用常规培养基稀释一下就可以继续使用了吧
作者:
荷荷
时间:
2013-12-9 15:15
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Amanda121201
的帖子
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* A3 ~' b3 t4 h# D
我们是临用前直接稀释，如直径100mm的培养皿，需要3ml胰酶，我们就加入2.4的生理盐水和0.6ml的正常胰酶，混匀。你可以自己尝试下，不同的培养基养出的细胞贴壁牢固程度不同，含血清的培养液可以1:1稀释，也可以直接使用。
作者:
18943340581
时间:
2013-12-11 13:41
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Amanda121201
的帖子
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胰酶一般是用PBS或者生理盐水稀释，我们用直径是100mm的培养皿，加2mL左右就行了。有的细胞贴壁很牢，也可以适当的加大胰酶的浓度，需要自己摸索了。
作者:
pcljsw2008
时间:
2013-12-18 09:16
首先剥华通氏胶要分离好，宁缺毋滥，还有如果纯度要高，p0代可用选择性培养基，上皮细胞会老化掉，然后传个一两代就基本是比较纯净的干细胞了
作者:
shizaihappy
时间:
2013-12-24 09:39
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Amanda121201
的帖子
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# V+ e3 J; z. h4 p- F/ F. t; P: I" C; k( y
三五天的的放置时间是稍长了点，一般较为理想的是48h之内，另外注意消化传代时胰酶不要太强烈，消化时间控制在1.5～2.5min，消化时可以在倒置显微镜镜下观察到细胞大部分由梭形变为圆形即可。杂细胞的问题在分离时多注意，动脉静脉和表皮肯定是不能要的了，少许杂细胞通过传代可以去除掉，3代或者4代基本就OK了。
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