干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 跪求组织块培养法从脐带中分离提取间充质干细胞的详细的实验步骤 [打印本页]

作者: luoermei11 时间: 2013-12-18 16:26 标题: 跪求组织块培养法从脐带中分离提取间充质干细胞的详细的实验步骤

跪求组织块培养法从脐带中分离提取间充质干细胞的详细的实验步骤

作者: qiqishichaoren 时间: 2013-12-19 09:15

准备耗材：两把有齿镊、一把剪刀、一个腰形盘或培养皿，( R/ W9 O6 [: \
准备试剂：1%抗生素的培养基
1.将脐带剪成2cm左右，清洗血液；
2.用有齿镊剥开一个口子，沿着纹理打开脐带，去除其中唯一的静脉、两根动脉，5 d9 L7 b# Z* B1 S: e& k
除表皮之外其余都是我们需要的华式胶，剪成小碎块就可以种瓶啦。+ v$ z/ \1 S' a" s) Q
3.加少量培养基，4、5ml即可，前一周多是为了让组织贴壁，贴壁以后的换液就是为了扩增细胞啦，之后就是普通的细胞培养过程啦。啦啦啦，讲完了

作者: 花饶然 时间: 2013-12-19 09:18

我们做的比较简单的：; M0 k7 A+ B% z( _4 z& H7 i: ^$ t- x
将脐带剪成小段，剥取华通氏胶，一定去除脐带中的动脉和静脉。剥取的胶放在离心管中，剪成2-3mm3的组织块。离心洗涤一次。完毕弃上清，加培养基混匀，加多少量取决于你种多大的瓶，比如我们一般用T75的，一般就加4毫升，记得培养瓶不要急于平放，我们是垫个小东西，让其形成斜面，组织基本贴住大部分后，再放进培养箱。一般四五天换液，换两次细胞基本都可以长好了，视密度进行传代或冻存。 x% ]0 G' ~) H6 o9 ~' m

作者: deshenglll 时间: 2013-12-19 12:57

回复 luoermei11 的帖子3 V# w4 W. {% ~$ I: g

你到网上直接搜啊。很多的。论坛里也有。自己去找吧。

作者: 荷荷 时间: 2013-12-20 10:01

回复 luoermei11 的帖子* a3 n' K- M) N* U" ^/ ]4 p

耗材：1把有齿镊、1把眼科镊、大小剪刀各一把、4个100mm培养皿
试剂：清洗液（1×双抗的生理盐水）、基础培养基$ g1 R: t. Q8 x
方法：
1.将脐带放入培养皿中，反复清洗，除干净里面的血液；. j( o; L/ K3 g( u  p0 t
2.将脐带放入一干净的加入基础培养基的培养皿中，剪成1.5cm的小段，沿静脉剖开；% N7 @- j7 D) G/ z5 Y9 A* ?6 U
3.剥干净静脉、动脉，用有齿镊剥离华通胶；4 t: r6 P' p$ O  Y9 D
4.将剥离的华通胶转入50ml离心管中，用大的剪刀将其剪成1-4mm2大小的块状，加生理盐水清洗几遍，出去里面的透明质酸（粘稠物）；1 h+ B+ e) Q  K
5.将组织块与完全培养基1:4混匀，接种，一般T75的瓶子加5ml即可；
6.每隔2天换液，换液2清洗组织块2遍，6-8天会有细胞爬出，如果细胞爬出注意换液时不要晃动组织块；; n$ _# M: u  [4 q+ W$ t
7.待组织块爬出的细胞量比较大时，传代，以后正常培养。

作者: luoermei11 时间: 2013-12-23 22:14

多谢楼上各位，小弟已知晓，多谢！

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)