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标题: 求明胶包被培养瓶的流程步骤 [打印本页]

作者: pydsn88 时间: 2013-12-19 16:18 标题: 求明胶包被培养瓶的流程步骤

如题课题组没人做过 ~~包括明胶该怎么灭菌我觉得这个好麻烦啊主要是不好过滤

作者: 星光灿烂 时间: 2013-12-19 16:39

这个我觉得自己做的话会很麻烦，而且每批的质量不能保证，鼠尾胶原和明胶都有成品买，也不是很贵呀

作者: shihuijunm 时间: 2013-12-20 15:25

回复星光灿烂的帖子; M9 h4 ]- N* t, P/ n- t
+ }- m& w8 X9 n) M' K4 d9 A
我们实验室用的是这个，你可以买
gelatin form bovine skin (Type B powder bioReagent)
suitable for cell culture ^" Z C. ~+ v$ f: m( y
sigma G9391-500G
CAS 9000-70-80 Q* o: |2 ]( l- I8 P0 Y/ O
用的时候用去离子水配成0.1%浓度，高压灭菌后就可以直接用了，用的时候放在37度培养箱跟培养皿作用30min，或者包被过夜都可以。

作者: xiaolizhang87 时间: 2013-12-20 15:40

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4 s: r7 K, F7 e/ \6 v
我们的做法是：sigma明胶粉末用DPBS溶解，于121℃，灭菌30min后，于-20度长期保存。包被之前提前一天4度过夜融化，用之前平衡至室温，随后用于包被（37度，1h；或4度过夜）。最好现用现包，不要包被好之后放置时间过长，会影响效果。

作者: embryonic12 时间: 2013-12-20 22:30

请问包被过程的具体操作，把胶放进培养皿就行了么？

作者: 星光灿烂 时间: 2013-12-23 09:44

我觉得你是对包被这个概念不太了解，其实很简单，就是把你已经处理（灭菌、稀释等等）好的明胶溶液加到你要包的培养皿中，以能够覆盖培养皿底部为准，哦，要稍稍多一点，不要为了节省就加的量比较少，否则放置一会还会出现覆盖不满的状况。加好之后放于37度，1小时或者4度过夜都可以，这样明胶会均匀贴到培养皿的底部，用之前用基础的培养基洗一遍或两遍就可以了。

作者: pydsn88 时间: 2013-12-30 15:34

回复 shihuijunm 的帖子. k: W& O1 H: `. C l
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非常感谢我买的跟你们一样的还想问一下，高压灭菌完了你们还用0.22um的滤膜过滤么

作者: pydsn88 时间: 2013-12-30 15:35

回复星光灿烂的帖子$ I! g) y6 L7 L" v J& a2 z& ~

非常感谢这些经验真的很重要

作者: pydsn88 时间: 2013-12-30 15:37

回复 embryonic12 的帖子

应该是把胶放进培养瓶孵育过夜之后再冲洗掉要的是站在瓶子壁上的

作者: pydsn88 时间: 2013-12-30 15:38

回复星光灿烂的帖子$ y- z0 G- Q, P' Y4 ^, v. C% d

您是说无菌液体包装的那种么我就觉得好遗憾我定试剂那会赶着圣诞节只有国外有货说得等个半个月才到一心急买的sigma的无菌粉剂还要自己配无菌操作最犯难了

作者: pydsn88 时间: 2013-12-30 15:40

回复 shihuijunm 的帖子/ v& |* {; U# M
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还有高压灭菌的话明胶里面的蛋白什么的成分不变性么？他的主要成分难道没有蛋白？有点困惑了~

作者: shihuijunm 时间: 2013-12-30 19:35

回复 pydsn88 的帖子

明胶的成分是蛋白质，但是是可以高压的，高压后我们实验室不过滤，经费允许的话，可以过，相关参考文献：[attach]58187[/attach] [attach]58188[/attach] j1 D6 @( |! H- p

如果你需要的话给我留个邮箱，我把相关文献发给你，每个实验室的方法都不尽相同。4 C0 p5 j9 j, L9 d5 B3 Q

作者: pydsn88 时间: 2013-12-30 20:56

回复 shihuijunm 的帖子" S# Z- h5 {5 u

非常感谢您！我的邮箱是pydsn88@126.com 麻烦您了

作者: pydsn88 时间: 2013-12-30 21:04

回复 xiaolizhang87 的帖子" h" x' `9 Y& _. m& P

额上面那位说用去离子水溶解即可用DPBS溶解是对明胶有促溶效果么？还有您的意思是一般37℃ 1h包被效果要比4℃过夜要好么？您一般是怎么处理呢平常 37℃ 1h 还是4℃过夜？

作者: xiaolizhang87 时间: 2013-12-31 09:00

回复 pydsn88 的帖子9 |8 F; N" n$ r p- H2 m6 u) t. f

我一般是37度包被1小时，在包被的时候，准备实验、处理细胞什么的，等准备差不多了，也基本上包被好了。

作者: 星光灿烂 时间: 2013-12-31 09:33

回复 pydsn88 的帖子) Y; w: Q+ E# E1 Z) X
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无菌液体包装最省事，用无菌稀释液稀释一下就行，粉剂也还好，就是多了几步操作而已，养细胞无菌操作是最基础的，别着急，做之前先想几遍怎么做，多练习就好。

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