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标题: 脐带间充质干细胞的培养 [打印本页]

作者: zhoufan025 时间: 2013-12-25 16:33 标题: 脐带间充质干细胞的培养

我是一名新手，从上个月开始养脐带，我发现前三根脐带长势都还可以，试剂，培养条件这些都没有变，可是后面连着的五根脐带都不行，有的20天了还没办法原皿消化，只有几个细胞，细胞形态也不是以前那种细长型的，而是比较短宽，请问各位前辈有遇到过这种问题吗，可能的原因有哪些，我该怎么改进？

作者: feifa1314 时间: 2013-12-25 17:06

用的是什么试剂？什么培养条件？

作者: zhangshich 时间: 2013-12-26 08:16

你的需要的答案在本版讨论很多，多在本版内看一看人家怎么做，最近有很多这方面的帖子。

作者: deshenglll 时间: 2013-12-26 14:39

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这你要自身从流程上找问题了。看看有没有消毒处理；分离的华通式胶的量多少；还有组织块的大小及分布；试剂只是一方面的原因。既然最近养的不太好，你就要2-3天观察一下。像脐带组织块培养早的话3-5天就可以观察到明显的细胞。最晚也就在7天左右吧。你再养养看。要是超过7天细胞还是比较少或是没有就不要再继续养了。祝你好运。有问题再讨论。

作者: zhoufan025 时间: 2013-12-27 10:30

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你好！无菌操作我执行得很严格，标本来源的话我觉得连着这么多有问题的可能性也比较少，原代培养也加了双抗的。有一份标本五个10MM的皿我把它们整合到了一个皿，长势很不乐观，另外有一份标本我把两个10MM的皿整合到一个T25的培养瓶里面，第二天还看到有一些细胞贴壁，第三天看的时候基本上都浮起来了，没办法继续养，只能丢弃了，实在是搞不清楚原因啊。

作者: tommary 时间: 2013-12-27 11:07

过早的传代很容易导致细胞死亡，所以很多文献强调达到80%融合才能传代

作者: feifa1314 时间: 2013-12-27 13:47

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为什么那么早整合到一起？
细胞没有彻底爬出来之前，不适合整合。

作者: deshenglll 时间: 2013-12-30 09:09

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我们培养都不加抗生素的。只要消毒比较彻底，没必要加的。做实验还好。要做库的话是不能加抗生素的。

作者: xiaoyuwsp 时间: 2013-12-30 14:52

自认为一切都没变时要考虑：1.一般外界气温有影响，天冷没有天暖长得好；2.并非种植的细胞越多越好，细胞多了可以造成营养不够，细胞长势不好或不长。有时为了救细胞，可以将细胞种植量少些，以保证营养。

作者: weijunning 时间: 2014-1-2 15:19

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为什么不能加抗生素？

作者: deshenglll 时间: 2014-1-3 13:46

回复 weijunning 的帖子. \- T: _3 c$ S$ H5 _
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你要能做到不污染可以不加的。加抗生素对组织块有影响的。

作者: 月_幻影 时间: 2014-1-3 14:17

楼主，原代培养不用加双抗的吧，我们做脐带的时候只是在清洗脐带的时候使用加了双抗的盐水，做原代的时候是不添加双抗的，而且加了双抗会对细胞的代谢有些影响，如楼主所说，既然自己严格执行了无菌操作，那么就要相信自己，再说即使原代的时候加了双抗，对于染菌的防治也是很低的，还不如规范操作来的安心一些！

作者: fenglinzhu 时间: 2014-1-13 16:33

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建库的话考虑到以后可能给人用，所以不能加双抗的，双抗可能会让人过敏嘛。此外还不能用胎牛血清啊什么的，反正好多东西都不能用的。

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