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标题: 拟胚体在神经元培养液中诱导出心肌细胞 [打印本页]

作者: 922922922 时间: 2014-1-27 10:54 标题: 拟胚体在神经元培养液中诱导出心肌细胞

各位老师好，小女在尝试IPS诱导神经元，采用诱导分化经典途径，即IPS-拟胚体-诱导分化培养。但是很意外的在诱导培养神经细胞14d时，出现貌似心肌细胞一样的，整个拟胚体在非常规则的自律性跳动。兴奋之余，又很想搞清楚到底是什么原因，请各位前辈看下我的protocol，究竟是哪里出了问题：
1、IPS正常培养& e' {1 Y, s1 f' ^. U
2、诱导拟胚体8天
3、在6孔板中诱导，出现“心肌细胞”的这空，无lif培养液培养3天，之后更换神经元培养液，在14d时出现自律性搏动。- o9 X( h) V" {9 S; U$ N" \
我的神经元培养液配方如下：0 c/ p8 }$ Z8 K9 y5 j: d/ v, b
100 mL# ~8 b. b+ p) _: @0 h0 |# y
Neurobasal medium 97 mL
50X B27 2 mL
100X GlutaMAX 1 mL: ~" V& x1 O( D/ A, s
100X P/S 1 mL

作者: chichao0000 时间: 2014-1-28 03:43

我没有做过ips，但是考虑到ips的多能性，在这些ips中可能存在心肌祖细胞，在诱导拟胚体过程中可能是这些心肌祖细胞繁殖了，出现了波动性心肌样细胞。建议如果想进一步证实是心肌细胞可以进行成心肌检测（心肌marker等）。想用ips诱导出搏动的心肌细胞应该也不容易，你应该是很认真也很幸运，因此最好记录下来（搏动的视频）。
还有个问题：你的细胞来源种属是人的还是鼠的？0 e% h3 Y/ |4 Z0 }" a
祝实验顺利0 V" i9 k7 S. q* X' b6 _* x

作者: 922922922 时间: 2014-1-28 09:36

回复 chichao0000 的帖子" u; l" q) A8 M7 O3 A0 B
1 D5 K, a! N) d1 Q2 `
谢谢chichao0000，我做的IPS是小鼠。按照您说的，已经记录下7分钟的视频了

作者: ligangtiancai 时间: 2014-3-12 00:47

这个情况很正常，miPS在没有LIF的情况下会自动向3胚层分化，你加入神经元培养基只能部分提高EB向Neuron的分化率，但还是会有心肌细胞形成的，我们的结果中使用20%FBS的EB培养基在不加任何细胞因子的情况下到第14天会有5.5%左右的细胞是cTnI阳性

作者: wanglimaomao 时间: 2014-3-12 11:56

拟胚体时间有点长了，时间长了拟胚体自发分化，肯定会有中胚层的细胞诱导分化，比如心肌细胞，内皮细胞等。建议你你配体时间稍微缩短一些，另外，在心肌诱导分化的文献中，是不是也有B27？而且所谓的神经诱导分化培养基，成分的量还是不够的。所以，建议补加一些专门神经诱导分化的细胞因子。可能会加速分化过程。祝实验顺利！

作者: Jonathan 时间: 2014-3-12 15:58

回复 ligangtiancai 的帖子7 ~% }, A- M* H: A/ M2 G' v0 `

同意

作者: 922922922 时间: 2014-3-12 16:04

回复 wanglimaomao 的帖子

谢谢您！

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