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标题: 弱弱问一句，邓宏魁的chemical ips有人重复出来吗？ [打印本页]

作者: iPSCs 时间: 2014-3-2 15:20 标题: 弱弱问一句，邓宏魁的chemical ips有人重复出来吗？

本人四个月前开始重复邓的ciPS，确实能看到形变，最后也能看到iPS样的克隆形成，但做好几次都得不到任何Oct4-GFP阳性的克隆，老板催得很紧，一直怀疑我是哪个地方出了问题，但我确实是按照原文的方法来做的，除非是化合物有问题，但都是在sigma上买的。也实在找不出其他问题了，我也听说我们学院另一个做干细胞的实验室也没重复出来（消息未必可靠）。我相信邓实验室的水平，如此重大的成果应该是经过了反复确证才发到science上的，论坛里面是否有重复过这个方法的，结果如何？大家能否一起交流一下？？？一起攻克难关。

作者: jessttt 时间: 2014-3-2 16:03

你再多重复两次，一般三次都还重复不出来的话，就可以理直气壮点地发email咨询一下通讯作者了。当然你现在也可以和你们学院另一个实验室的操作人员交流一下，看他们遇到的瓶颈在哪里，然后咨询通讯作者。只是个人小小建议哈:):loveliness:

作者: zhen022 时间: 2014-3-2 19:46

听他们说这几篇文章都是做了好几年，历尽辛酸啊；论坛里面有他们实验室的人，期待给你们的回复啊！！！！不过说实在的，实验重复本身有很多影响条件，不光是paper里面的条件要控制好，自己的技能方面也有很重要因素。以前做iPSC分化的时候就发现，同样的iPSC，可能很小的因素影响到细胞的状态，那么定向分化效率就有很大变化。。。

作者: have-a-rest 时间: 2014-3-2 20:13

三次重复不出来就可以理直气壮了？呵呵!
实验是有些技巧的，看文章是那么个过程，作者（Deng等）也是这么过来的，那也是失败若干次之后才会成功的，所以多从自身找原因吧！

作者: have-a-rest 时间: 2014-3-2 20:14

三次重复不出来就可以理直气壮了？呵呵!9 m* l9 l; G; s* m
实验是有些技巧的，看文章是那么个过程，作者（Deng等）也是这么过来的，那也是失败若干次之后才会成功的，所以多从自身找原因吧！

作者: friendly0722 时间: 2014-3-3 08:10

最近也准备这样做，看到大家没有重复出来，郁闷了。求交流啊。

作者: zm19900508 时间: 2014-3-3 08:45

没重复出来，听说了好几个实验室都重复不出来。有重复出来的求交流啊

作者: suxiaomei 时间: 2014-3-3 13:40

我也重复过，但是在加入DZNEp的一周的时候，细胞污染。但是这个过程中，只有SOX2,CDH1上调，OCT4雷打不动。很快转方向了。就没在继续。貌似和LZ的情况有些相似。毕竟OCT-GFP阳性只是启动子的激活。DENG用的是转基因小鼠成纤维细胞吧。你们也是吗

作者: iPSCs 时间: 2014-3-3 14:41

回复 suxiaomei 的帖子
7 y7 e9 Z( I# F( L8 N
用的MEF细胞系跟邓实验室是一样的，都是OG2小鼠胚胎发育到13.5天时分的。

作者: murong 时间: 2014-3-3 15:29

实验技能可能有差别，另外，也许还有什么特别注意的可能作者没有写出来吧，我觉得可以以一个学生的心态请教下教授的。

作者: 紫式洛 时间: 2014-3-4 08:23

没听说有其他实验室重复出来的，话说改一下加入的小分子的量，会不会有所改善呢？

作者: sylar.wy 时间: 2014-3-4 08:52

听说全球没有重复出来的哦。。。

作者: iPSCs 时间: 2014-3-4 09:23

回复 sylar.wy 的帖子
+ V( H' c1 |$ T( R, ]! l: S
楼上为啥这么说？如果是某些细节没有公布那还好，邓如果对自己的文章有信心，就应该采取一些措施，尽可能提供支持让世界上最多的实验能重复出来，不然如果世界上其他实验室都没发重复出来，不出多少时间，估计邓就要处于风口浪尖只上了，这对国内的科研是极其不利的。

作者: 石山巨石 时间: 2014-3-4 10:00

同一家公司牌子的试剂在不同产地厂家生产质量有略微差异这个在大洲之间比较明显比如美国SIGMA的某试剂和欧洲SIGMA的某试剂但是不知道在国内是不是有这种差别

他是不是保密了某部分这样自己以后可以开公司赚钱。。。。。

作者: 青后 时间: 2014-3-4 12:39

我们也没重复出来不浪费精力在这上面了
6 s2 E+ Z6 J% ]. g+ \, C- n
补充内容 (2014-3-4 12:40):0 m4 W" C0 v, C# ~4 k
有次开会有人问邓老师了他说要我们调整浓度自己调感觉很没意思

作者: iPSCs 时间: 2014-3-4 12:46

回复青后的帖子

他们文章里面做出来的效率跟正常用OSKM做出来的差不多，不算太低。而我们按照他们的方法做出来一个克隆都得不到，让我们调整浓度这是简直是笑话，如果浓度不对他们还敢写到paper上，不知这算不算学术不端？

作者: iPSCs 时间: 2014-3-4 12:58

另外，除了这篇science，他们的那篇cell封面的文章（reprogramming by lineage specifiers）我也听说有些实验室重复的情况不够理想，也许是其他实验室的重编程平台不同所致，在没有可靠证据的情况下我不敢乱下结论，不知道其他实验室情况如何？

作者: 青后 时间: 2014-3-6 15:36

gata3这篇正好验证了我们的一个实验结果，个人认为还是挺可信的，我们找邓老师要了质粒，测序，重复中

作者: suxiaomei 时间: 2014-3-16 17:36

国内就没有做出来吗？？？？？？？？

作者: Ethan-Liu 时间: 2014-4-24 15:56

文章里给的浓度是个范围啊

作者: bioon 时间: 2014-4-24 16:18

要是生物重编程技术能像计算机编程能有开源共享的就好了，也能促进技术更快发展，利于创新。

作者: Ethan-Liu 时间: 2014-4-24 18:44

青后发表于 2014-3-6 15:36 " \( J1 m0 ]- S
gata3这篇正好验证了我们的一个实验结果，个人认为还是挺可信的，我们找邓老师要了质粒，测序，重复中

' v9 ]2 o; Q; T0 ]
你们的成果发表了吗

作者: 滴答滴答雨 时间: 2016-5-8 00:49

不知道楼主最后做出来没有. C' `0 i8 ]% z1 d6 f
我个人做的尿液细胞诱导ips感觉初始细胞的状态很重要，还有冻存复苏的操作也重要。" S3 L1 E( a+ Q
初始的细胞状态老，代次高，分裂速度慢打死做不出来的。
MEF我也分过，觉得对技术要求比较高，很多影响最后获得的细胞状态的因素……、

作者: 张月儿 时间: 2016-5-21 17:35

那都是人家做了不知多少次做出来的，哪有那么容易重复出来，不过有机会可以和邓实验室的人员交流一下，毕竟有很多诀窍和小细节，文章中并没有写出来。

作者: gxbzjznn 时间: 2017-5-11 08:49

可以重复出来！

作者: 573639471 时间: 2017-8-6 09:43

回复 gxbzjznn 的帖子9 Q6 w1 G' M% ?. U4 ?

你做过么/ H' O9 f9 Z1 f' @9 {5 C; Y
求教具体方法

作者: gxbzjznn 时间: 2017-8-7 21:27

回复 573639471 的帖子

私聊

作者: 云梦浩瀚 时间: 2017-11-1 14:59

我们实验室重复出来了，这都17年了，大家估计还在重复邓老师方法的人也不多了

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