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标题: 心肌分化的paper，共享一下了【原作者发布 欢迎提问】 [打印本页]
作者: Jonathan    时间: 2014-3-4 15:43     标题: 心肌分化的paper，共享一下了【原作者发布 欢迎提问】

本帖最后由 细胞海洋 于 2014-3-7 15:58 编辑
+ E2 v- I- V5 y  M4 T: y
0 A5 R" G9 q. Y5 y. k- Shttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24564569
8 s9 F# s) W4 y$ Q  k+ T) ]4 e; Q/ \+ P1 `" s# r; s& m
看看接收的。有问题可以问我
7 `# O# G9 n8 G0 E5 a
% O. w; G' D8 n% l海洋注：5楼原文
作者: chips100    时间: 2014-3-5 11:09

心肌最后分化到几天，测的心室肌指标
作者: 智露    时间: 2014-3-5 19:09

我现在怎么每次悬滴到悬浮状态中看到的EB好小，不知道为何数目不够，以前做的都很好，我确定计数没有问题，是mES不行吗？
作者: zhouhuaxizhu    时间: 2014-3-6 09:18

这篇文献用的是人的胚胎干细胞或者诱导多能干细胞通过EB做的心肌分化实验，我没有全文权限。我做过几次人的多能干细胞EB法分化细胞，都没有形成EB，我不知道原因在那儿，鼠的就非常容易而且成功获得心肌细胞。请有经验的大侠们不吝赐教。
作者: xiao_jiajia    时间: 2014-3-6 10:22

A simple, cost-effective but highly efficient system for deriving ventricular cardiomyocytes from human pluripotent stem cells.
作者: Jonathan    时间: 2014-3-7 17:42

回复 chips100 的帖子% w+ [& l( L7 \

3 W0 W! n% e' y1 S5 P测指标基本都在30多天测的。主要用patch clamp，其他指标我们直接用auto-patch的机子测其他current
作者: Jonathan    时间: 2014-3-7 17:43

回复 智露 的帖子7 B$ P) S( J( |0 T+ L! i
4 E5 C6 _5 d8 Z; K
悬滴法是比较原始的。细胞状态很重要。我做的不多。
作者: Jonathan    时间: 2014-3-7 17:44

回复 zhouhuaxizhu 的帖子
' |( x5 q9 p7 Q1 ?' U# s) g( [
: \, P, N/ p; w7 r1 ^你看看我这个paper里面写的方法，效果很好。一个well，可以形成6-12个well的悬浮EB，每个well有大概1000-2000个EB球。EB形成多少和细胞系有关，还和细胞的状态有关
作者: 刘森泉    时间: 2014-3-10 09:45

回复 Jonathan 的帖子0 ~7 {& G4 _. Y) o
# m6 R" y* E, @  P9 c6 U. n& I
请问第1天消化成单细胞后培养在mTesR里，加Matrigel(40 μg/ml)？是固体培养？还有有试过开始几天也常氧培养吗？谢谢。
作者: Jonathan    时间: 2014-3-10 10:46

回复 刘森泉 的帖子
8 |7 A7 A" `9 ~) x0 s" w  k
' ~& B( {0 C. E- C- C消化成单细胞后，加matrigel，其实是用4度的mTeSR1把matrigel溶解。所以肯定还是液体培养。有试过用normaxia的，效果不如hyperxia的好。
作者: zhouhuaxizhu    时间: 2014-3-10 13:21

回复 xiao_jiajia 的帖子% k4 ]9 [5 \( C# h7 j" y4 H

* E0 B% k2 `- k* |8 [# p非常感谢，正愁下载，你就提供全文了。非常感谢。
作者: zhouhuaxizhu    时间: 2014-3-10 13:23

回复 Jonathan 的帖子; W2 a; \- F. U
$ ]. @  P% t; A* H
楼主可以说的详细一些吗？最好把原始文献或者你的详细protocol发我一份。非常感谢。你用的是人的多能干细胞吧？
作者: Jonathan    时间: 2014-3-10 13:24

回复 zhouhuaxizhu 的帖子3 ~' S& o. v3 n4 p

7 }- |% Q! ?% e% a: z6 d5楼有原文。你可以下载。用的都是人的ES或者IPS
作者: zhouhuaxizhu    时间: 2014-3-11 21:56

回复 xiao_jiajia 的帖子
1 N  q7 b8 b0 F4 Y
6 R7 a, A7 s/ V" \* K) I, |楼主能把这篇文献的附件部分包括几个vedio下载下来吗？非常感谢。我特别想看看他们的搏动的心肌细胞跟单层培养诱导出的有何不同。非常感谢。
作者: xiao_jiajia    时间: 2014-3-12 11:52

回复 zhouhuaxizhu 的帖子
% G* k0 |3 Z9 I) _! G
9 T- q4 O: |. H9 L% s8 k8 |- I/ x! c非常抱歉，没有下载到。
作者: Jonathan    时间: 2014-3-12 15:54

回复 zhouhuaxizhu 的帖子" P# P$ _" J4 ~2 W/ k

) V3 A: A& E2 B" c2 t/ w# K4 B你想看的video是指cluster状态的还是消化后monolayer的？
作者: zhouhuaxizhu    时间: 2014-3-13 09:32

回复 Jonathan 的帖子
5 E+ k; `1 \* s" Y, w* [, B' |) H+ s* i" h! x7 \' }+ z# L1 V. E
附件所有的vedio，好像只有两个。谢谢。
作者: spongezhao    时间: 2014-4-1 16:09

楼主你好，我想问一下你从消化分化的心肌到做膜片钳，中间是如何处理细胞的呢？
作者: Jonathan    时间: 2014-4-1 16:13

回复 spongezhao 的帖子8 |% B/ N' B1 n7 n

) K( x, q! T4 T3 Q用collegenase IV消化20-30分钟，然后0.05的trypsin消化5分钟。铺到10mm玻璃片上面就可以。等过几天细胞就可以用了。每个玻璃片大概5000个细胞
作者: spongezhao    时间: 2014-4-1 16:38

楼主，你好，我想问下你DAY0的时候Matrigel是稀释多少倍用的呢？和mTeSR1混合的比例是？
作者: spongezhao    时间: 2014-4-1 16:59

回复 Jonathan 的帖子# A" s$ [8 F6 k  J
: Q( r3 |  Z- h1 W: ]
谢谢楼主，我还想问下这时候用的还是StemPro+Vc维持培养吗？
: {8 ]0 r; v, u另外，整个过程中一直是在ultra-low-attachment 6-well-plates中悬浮培养的吗？没有贴壁的过程吗？
作者: Jonathan    时间: 2014-4-2 10:07

本帖最后由 Jonathan 于 2014-4-2 10:08 编辑
7 A, N' S! a# h7 u. ]# N0 Q
, a% U; R5 D/ u2 [4 E回复 spongezhao 的帖子
% C, I& ]8 Z+ ]. ?2 j: {2 v8 y- W
7 M) s3 z8 p2 N2 J消化之后用的是Stempro 34+VC.一路悬浮培养。
作者: Jonathan    时间: 2014-4-2 10:08

回复 spongezhao 的帖子" Q/ ^7 L' M- w9 N3 v, |0 U" v

- u0 j) B5 F+ b2 k! C, Vmatrigel根据公司来的单子，你自己计算一下。每次加的量稍稍不同
作者: dilal    时间: 2014-5-6 18:10

回复 Jonathan 的帖子
4 m. n% p2 p) L' J, `
* f4 z8 a3 ]6 F1 O9 o谢谢楼主分享，好好学习下



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