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标题: 包被方法诱导NK细胞的可能性！！！ [打印本页]

作者: 大海之家 时间: 2014-3-7 10:05 标题: 包被方法诱导NK细胞的可能性！！！

大家好，小弟现在在做NK方面的研究，有文献报道，单纯依靠可溶性细胞因子如IL-15，IL-21，IL-7，IL-18或者单抗CD137等是很难诱导足够数量的NK细胞的，所以我想采用包被的方法。单抗和这些细胞因子容易包被在培养瓶吗，不知道大家有没有做过类似实验呢，欢迎大家指点迷津！不甚感激。

作者: weijunning 时间: 2014-3-7 11:37

可以用包被的方法。我们一直用包被的方法。

作者: zhenhuale 时间: 2014-3-7 13:51

抗体可以包被，其他细胞因子不容易包被

作者: 大海之家 时间: 2014-3-7 15:52

这个是我有疑惑的地方之一，看了很多文献，都说NK诱导单靠可溶性细胞因子是很难大量扩增的，固相刺激反倒有些效果，我打算用CD137和IL-21联合包被，IL-21 1000U每ml，看看效果。另外，大家是用专门的NK分离液分离NK，还是用淋巴细胞分离液分离?有没有使用专门的NK培养基培养NK呢？

作者: 大海之家 时间: 2014-3-7 15:52

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这个是我有疑惑的地方之一，看了很多文献，都说NK诱导单靠可溶性细胞因子是很难大量扩增的，固相刺激反倒有些效果，我打算用CD137和IL-21联合包被，IL-21 1000U每ml，看看效果。另外，大家是用专门的NK分离液分离NK，还是用淋巴细胞分离液分离?有没有使用专门的NK培养基培养NK呢？

作者: 大海之家 时间: 2014-3-7 16:35

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有没有其他你觉得可以的方法？你们做的数量和表型能达到多少？

作者: zhenhuale 时间: 2014-3-13 11:01

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我们做的NK数量不多，50ml血可以做到20亿左右，纯度在90%左右

作者: 大海之家 时间: 2014-3-17 10:02

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你们NK是如何分离的？是直接用PBMC培养，还是使用分选系统进行NK的分选？

作者: weijunning 时间: 2014-3-25 11:46

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没有，我们就是使用普通的淋巴细胞分离液进行人外周血单个核细胞的分离，之后再进行NK培养。NK细胞培养基很贵的，大约2500元/瓶，500ml/瓶。

作者: 大海之家 时间: 2014-3-28 14:56

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能分享下你们大概的一个培养方法吗，比如说采血量是多少，培养基总的体积，最终的培养数量是多少等等，另外，使用了这种培养基的同时还需要对细胞进行前期包被处理？

作者: 大海之家 时间: 2014-4-1 09:33

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请问你们NK细胞培养是使用NK细胞培养基还是淋巴细胞培养基的？是包被诱导还是悬浮诱导？

作者: ccst4838318 时间: 2014-4-1 10:36

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50ml血扩增20亿个细胞单细胞量确实不怎么多，但是你的纯度可真是高啊，是CD3-/CD16+/CD56+细胞达90%，还是只是CD3-/CD56+细胞达到90%呢？想问下你这个这么高的纯度是怎么做到的？还有就是你的细胞因子是不是用的有点多呢，我们只用三种细胞因子细胞量就能达到60个细胞，但是纯度相对很低，CD3-/CD16+/CD56+只有30%，培养瓶没有包被。( X2 m8 r) Q5 O7 f
再问下，你用的是什么NK细胞专用培养基？

作者: ccst4838318 时间: 2014-4-1 10:57

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50ml细胞量扩增20亿个细胞，就细胞量上来说不是太多，但是90%的纯度确实很高，你是怎么做到的，免疫磁珠分选了吗？我用50ml血可以扩增细胞量达到60亿个左右，但是纯度很低，CD3-/CD16+/CD56+细胞只有30%，对于你的90%我很好奇？还有就是你说你用的专门的NK细胞培养基，请问是什么培养基?

作者: ccst4838318 时间: 2014-4-1 11:03

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什么培养基，有没有跟其他的淋巴细胞培养基做下对比，到底有多大的提升空间？我们做的没有进行培养基包被，因为是做临床治疗的，为了安全起见，虽然细胞量还可以，但是纯度较低，因此我非常想知道包被之后的NK细胞量和纯度上，在同样的培养体系下，和未包被的到底有多大的差别？所以想问问你，能不能给个具体的数据支持呢？

作者: gondobar 时间: 2014-7-2 02:11

包被的方法挺实用的，可以选择包被，血清用自体的，一般1%，看细胞状态适量调整。培养基干细胞的就行。

作者: yanglixia1984 时间: 2014-8-19 17:14

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把因子直接包被到培养瓶上吗，如何包被呢

作者: yanglixia1984 时间: 2014-8-19 17:15

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文献上有将这些因子通过转基因的方法表达与滋养细胞表面，然后与单个核共培养

作者: yanglixia1984 时间: 2014-8-19 17:16

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你好能分享一下NK 的培养流程吗

作者: yanglixia1984 时间: 2014-8-19 17:17

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普通的培养基就可以了

作者: sonsyoran 时间: 2014-8-26 13:18

今天看到一个专利上写用CD3和CD52包被，再用IL2刺激。仅供参考

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