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标题: 如何使50ml的外周血在体外培养出10*10的细胞数量 [打印本页]

作者: yangpan521 时间: 2014-3-18 17:02 标题: 如何使50ml的外周血在体外培养出10*10的细胞数量

做了多次总是细胞数量达不到，健康人抽血100ml，用培养袋培养，最终体积月2.5l,培养基为GT-T551，分3次放出细胞但每次细胞量1-2X10*9左右，总数量也达不到10*10，为什么，请高手指导

作者: ccst4838318 时间: 2014-3-19 09:16

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你的100ml血液，最总培养体积才2.5L，是不是太少了点，这么大的血量要达到10*10，是很容易的。建议两点1.细胞因子的浓度是否合适，条件允许可以适当加大下因子使用量；2.如果培养过程中细胞增殖速度跟得上传代速度，可以考虑扩大培养体系，100ml的血液，最终培养体系应该有4-5L的。

作者: hwlightning 时间: 2014-3-19 11:26

健康人十三十四天轻轻松松就能上那么多，扩大培养体积。我培养的有的十天就OK了。

作者: yangpan521 时间: 2014-3-19 12:40

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请问你用的培养基是GT-T551，还是什么？一瓶就要400多，用4-5L就快3000了，成本很大的

作者: xinquan15 时间: 2014-3-19 15:22

我们一般每升都能到3e+6的密度，再长活率会下降，到1E+10，3L左右没问题，10*10还没试过，注意因子，自体血清，和细胞密度的调整

作者: aochongyu 时间: 2014-3-19 16:27

一般50ml血基本十三四天左右就可以达到5×109,按你说的血量应该可以达到10*10，是不是培养方法需要改进

作者: ccst4838318 时间: 2014-3-20 09:13

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我们用的也是GT-T551培养基，如果100ml的血液你觉得培养基用量太大，成本高，就选择50ml血液，按照你现在的总体积2L来培养，细胞情况好的话细胞量是能达到6-8×10*9，至少血量上是少了一半

作者: 郭丽杰 时间: 2014-3-20 09:28

50mL血用2LT551培养基14天完全可以达到10次方，需要优化你的培养体系

作者: yangpan521 时间: 2014-3-20 13:56

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问题是，培养基一直是橙红，也没变黄，不那么多培养基，就一定长吗？ r6 \$ K& m* t" t0 s

作者: ccst4838318 时间: 2014-3-24 08:48

回复 yangpan521 的帖子# D3 s7 ~' U( G. M2 z$ T

培养基一直是橙红色，说明你细胞状态不好，细胞代谢慢，增长慢，甚至是不增长了，这你就得重新思考下你的培养条件是否合适，或者是外在条件比如培养箱设置，细胞因子是否正确，存不存在误差什么的

作者: shamoye 时间: 2014-3-27 09:51

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培养天数在多少天？

作者: shamoye 时间: 2014-3-27 09:52

回复郭丽杰的帖子$ d1 s3 K7 ^" W0 J
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怎样优化？求指点

作者: shamoye 时间: 2014-3-27 09:54

回复 yangpan521 的帖子: _- o' R% g' B( z9 [4 [# q

细胞密度太低也不会长的我们一般在(1~2)*10(6)左右

作者: thor0504 时间: 2014-3-27 10:15

调整下培养体系吧，我们原来的培养体系也不行，从最初的细胞收集开始，到各步的操作、培养条件逐一的实验一下吧。

作者: ccst4838318 时间: 2014-3-27 12:37

回复 shamoye 的帖子# } C) j4 z; n" r! o
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培养14天就可以得

作者: zhrt 时间: 2014-3-28 10:35

回复 yangpan521 的帖子9 F! d/ X# ?; h+ j- j( v
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添加培养基时要注意细胞的浓度

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